PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 对虾桃拉综合症病毒(TSV)检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64058
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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杨烂皮壳蕉孢菌CD30抗体Human NPY(Neuropeptide Y) ELISA Kit人腺嘌呤核苷酸转运蛋白(ANT)自身抗体试剂盒
腐蚀柠檬酸杆菌角蛋白19,17,14,42,10抗体Human HAS3(Hyaluronan Synthase 3) ELISA Kit人腺苷脱氨酶(ADA)试剂盒
pRE112 角蛋白10抗体Human PRODH(Proline dehydrogenase 1, mitochondrial) ELISA Kit人腺苷酸环化酶1(AC-1)试剂盒
黑马朗假丝酵母电压依赖性钙通道Cav1.1抗体Human DJ-1/PARK 7 ELISA Kit人腺苷三磷酸结合盒转运体G2(ABCG2)试剂盒
爱媛链轮丝菌肌酸磷酸激酶2抗体Human NAC-alpha(Nascent polypeptide-associated complex subunit alpha) ELISA Kit人腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)试剂盒
枯草芽孢杆菌烟碱型乙酰胆碱受体α7抗体Human GRIA1(Glutamate receptor 1) ELISA Kit人腺病IgM(ADV-IgM)试剂盒
鸡伤寒沙门氏菌氯离子通道调节蛋白1A抗体Human PARK2(E3 ubiquitin-protein ligase parkin) ELISA Kit人腺病IgG(ADV-IgG)试剂盒
亚球毛壳粘蛋白-1/上皮膜抗原抗体Human MFN2(Mitofusin-2) ELISA Kit人腺病36抗体(AdV36-Ab)试剂盒
干草寒冷杆菌CWF19L1蛋白抗体Human TRXR3(Thioredoxin reductase 3) ELISA Kit人腺病3(ADV3)抗体(IgG)试剂盒
谷氨酸棒杆菌心动加速蛋白多肽抗体Human GRIA1(Glutamate receptor 1) ELISA Kit人线粒体肽蛋氨酸亚砜还原酶(MSRA)试剂盒
纤维微菌属通道相互作用蛋白3抗体Human NT-proCNP(N-Terminal Pro-C-Type Natriuretic Peptide) ELISA Kit人线粒体呼吸链复合物I 试剂盒
鸭疫里氏杆菌12号染色体开放阅读框29抗体Human NAC-alpha(Nascent polypeptide-associated complex subunit alpha) ELISA Kit人酰基化饥饿素(AG)试剂盒
解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种12号染色体开放阅读框49抗体Human PARK2(E3 ubiquitin-protein ligase parkin) ELISA Kit人纤维母生长因子受体1癌基因伴侣(FGFR1OP)试剂盒
Rhizobium miluonense12号染色体开放阅读框50抗体Human TRXR3(Thioredoxin reductase 3) ELISA Kit人纤维介素蛋白(fgl2)试剂盒
优洛菌素链霉菌12号染色体开放阅读框53抗体Human NT-proCNP(N-Terminal Pro-C-Type Natriuretic Peptide) ELISA Kit人纤维胶凝蛋白3(FCN3)试剂盒
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神经突触粘附样分子1抗体麦冬二氢高异黄A,麦冬黄烷A 4-Bromobenzylamine
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富含亮氨重复家庭蛋白4抗体麦冬黄烷B Tetrahydropalmatine
瘦素受体抗体(长)溴东莨菪(标准品) Tetrahydropalmatine
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Nogo受体反应蛋白抗体见血飞(标准品) Pregnenolone Acetate
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层粘连蛋白抗体箭根薯(标准品) Chitosan
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粒趋化蛋白2抗体PEA3/FITC 荧光素标记多瘤促活化因子抗体IgG