使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 解脲脲原体检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64061
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就��高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
球孢白僵菌克仑特罗/抗体Human α1-AT(Alpha 1-Antitrypsin) ELISA Kit人角蛋白18-M30(CK 18-M30)试剂盒
枯草芽孢杆菌斯氏亚种6号染色体开放阅读框151抗体Human α2-AP(α2-Antiplasmin) ELISA Kit人角蛋白18(CK-18)试剂盒
秦氏蜜环菌15号染色体开放阅读框52抗体Human αHSP(Alpha-Hemoglobin Stabilizing Protein) ELISA Kit人间粘附分子3(ICAM-3/CD50)试剂盒
嗜盐拟诺卡氏菌2号染色体开放阅读框89抗体Human β-actin(Beta actin) ELISA Kit人间粘附分子2(ICAM-2/CD102)试剂盒
瘦弱盐扁平菌BCL10结合蛋白和激活核转录因子抗体Human ACP(Acid phosphatase) ELISA Kit人间粘附分子1(ICAM-1/CD54)试剂盒
相思根瘤菌凋亡加强结构域蛋白15抗体Human MBP(myelin basic protein) ELISA Kit人性T相关抗原4(CTLA-4/CD152)试剂盒
美澳型核果褐腐病菌慢性白血病缺失基因6蛋白抗体Human SOCS4(Suppressor Of Cytokine Signaling 4) ELISA Kit人素相关蛋白A(CagA)抗体(IgG)试剂盒
米曲霉13号染色体开放阅读框38抗体Human AA(Arachidonic Acid) ELISA Kit人素相关蛋白A(CagA)试剂盒
白僵菌14号染色体开放阅读框140抗体Human VASPIN(Visceral Adipose Specific Serine Protease Inhibitor) ELISA Kit人凋亡相关斑点样蛋白(PYCARD)试剂盒
溶壁酶(lywallzyme)阳离子转运调节样蛋白2抗体Human VEGF165(Vascular Endothelial Growth Factor165) ELISA Kit人硒结合蛋白1(SELENBP1)试剂盒
大肠埃希氏菌15号染色体开放阅读框62抗体Human VEGF-B(Vascular Endothelial Cell Growth Factor B) ELISA Kit人硒蛋白P(SEPP1)试剂盒
美澳型核果褐腐病菌15号染色体开放阅读框41抗体Human VIL1(Villin 1) ELISA Kit人戊型肝炎病抗体(IgM)试剂盒
大肠埃希菌环核苷酸阳离子通道蛋白α2抗体Human VEGF-D(Vascular Endothelial Growth Factor D) ELISA Kit人戊型肝炎病抗体(IgG)试剂盒
宋氏志贺氏菌钙连蛋白抗体Human τPK1(Tau-Protein Kinase) ELISA Kit人戊糖素(Pentosidine)试剂盒
耻垢分枝杆菌二氢嘧啶酶相关蛋白2抗体Human TPA(Tissue Polypeptide Antigen) ELISA Kit人舞蹈病蛋白相互作用蛋白1(HIP1)试剂盒
深绿木霉色素P450ⅡE1抗体Human TPS(Tryptase) ELISA Kit人五聚素3(PTX3)试剂盒
解脲脲原体检测试剂盒(荧光PCR法)植物25羟维生素D3罗汉果苷III(标准品)Human, Mouse
兔8-异构前列腺素罗汉果苷IV(标准品)Human
大鼠内源性糖皮质**罗汉果黄素Human, Mouse
大鼠柠檬合酶罗汉果皂苷IvaHuman
兔子血小板因子4罗汉果皂苷Ive(标准品)Human, Mouse, Rat
植物维生素C罗汉果皂苷V(标准品)Human
小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6罗汉果皂苷ⅡA2Human, Mouse
人集落激因子罗汉果皂苷ⅢA1Human
兔子β血小板球蛋白/β血栓环蛋白罗汉果皂苷ⅢeHuman
磷脂酰蛋白聚糖-4抗体pEGFR(pTyr1068)/FITC 荧光素标记抗磷酸化表皮生长因子受体抗体IgG
眼镜蛇蛇蛋白抗体PEG3/FITC 荧光素标记PEG3蛋白抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。