使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 单纯疱疹病毒1型检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64070
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④��基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
孟氏假单胞菌CD36抗体Human Pro-MMP-1(pro-Matrix Metalloproteinase 1) ELISA Kit人髓鞘相关糖蛋白(MAG)试剂盒
毕赤酵母固酮合成酶CYP11B2抗体Human pNF-H(Phosphorylated Neurofilament H) ELISA Kit人髓鞘碱性蛋白抗体(MBP antibody)试剂盒
汉逊德巴利酵母7号染色体开放阅读框16抗体Human PP(Pepsin) ELISA Kit人髓鞘蛋白P0(MPZ)试剂盒
香矛假单胞菌10号染色体开放阅读框62抗体Human PPAR-α(Peroxisome ProlifeRator Activated Receptor Alpha) ELISA Kit人髓磷脂碱性蛋白(MBP)试剂盒
大豆慢生根瘤菌胃癌多药耐药相关蛋白Human PP13(Placental Protein13) ELISA Kit人髓磷脂P2蛋白(PMP2)试剂盒
亮白曲霉酪蛋白激酶casein kinase Iα抗体Human PPAR-γ(Peroxisome ProlifeRator Activated Receptor Gamma) ELISA Kit人髓过氧化物酶特异性抗中性粒胞质抗体IgG(MPO-ANCA IgG)试剂盒
米曲霉磷酸化酪蛋白激酶casein kinase Iα抗体Human Pro-MMP-10(Pro-Matrix Metalloproteinase 10) ELISA Kit人髓过氧化物酶(MPO)试剂盒
干草寒冷杆菌磷酸化酪蛋白激酶casein kinase Iα抗体Human PPP1R1A(Protein Phosphatase 1 Regulatory Subunit A) ELISA Kit人酸性铁蛋白(AIF)试剂盒
Sinomonas flave肌动蛋白调节蛋白CAPG抗体Human PPOX(Protoporphyrinogen Oxidase) ELISA Kit人酸性神经鞘磷脂酶(ASM)试剂盒
苏云金芽孢杆菌Ⅰ型胶原/1型胶原a1抗体Human PPAR-α(Peroxisome ProlifeRator Activated Receptor Alpha) ELISA Kit人酸性磷酸酶(ACP)试剂盒
假诺卡氏菌Ⅲ型胶原蛋白/胶原蛋白3/3型胶原蛋白抗体Human PRB1(Basic Salivary Proline Rich Protein 1) ELISA Kit人酸性富亮氨酸核磷蛋白32家族成员E(ANP32E)试剂盒
地衣芽孢杆菌CD96抗体Human PPP1R1A(Protein Phosphatase 1 Regulatory Subunit A) ELISA Kit人酸性成纤维生长因子(aFGF/FGF-1)试剂盒
平菇猫眼综合征染色体候选基因2抗体Human PPAR-γ(Peroxisome ProlifeRator Activated Receptor Gamma) ELISA Kit人四氢生物蝶呤(BH4)试剂盒
酿酒酵母1号染色体开放阅读框146抗体Human PK2(Prokineticin 2) ELISA Kit人四连接素(CLEC3B)试剂盒
枯草芽孢杆菌1号染色体开放阅读框150抗体Human PPOX(Protoporphyrinogen Oxidase) ELISA Kit人死亡相关蛋白1(DAP/DAP1)试剂盒
黑曲霉1号染色体开放阅读框156抗体Human PK(Pyruvate Kinase, Liver And RBC) ELISA Kit人丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)试剂盒
单纯疱疹病毒1型检测试剂盒(荧光PCR法)质金属蛋白酶-1(小鼠抗原)八角莲(标准品)Human, Mouse
中脑核仁蛋白1(抗原)八角麻(标准品)Human
中脑核仁蛋白2(抗原)巴豆(标准品)Human
一种应激分子抗原巴豆苷(标准品)Human
多药耐药相关蛋白3(抗原)巴戟天(标准品)Human, Mouse, Rat
多药耐药相关蛋白1(抗原)巴利森苷A;派立辛(标准品)Human
肺耐药相关蛋白(抗原)巴西苏木素(标准品)Human
间皮素(多肽抗原)芭蕉根(标准品)Human
MSH2抗原菝葜皂苷元,知母皂苷元(标准品)Human, Mouse, Rat
G蛋白修补结构域蛋白4抗体PHD3 /FITC 荧光素标记脯氨酸羟化酶抗体IgG
富含GC启动子结合蛋白1/血管壁相连蛋白抗体phospho-FAK(pTyr577)/FITC 荧光素标记抗磷酸化粘着斑激酶抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。