PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 亨德拉病毒检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64078
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
球毛壳菌几丁质酶结构域蛋白1抗体Human MYH10(Myosin Heavy Chain 10, Non Muscle) ELISA Kit人乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)试剂盒
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人参土成对杆菌几丁质酶1抗体Human MAN1A1(Mannosidase Alpha Class 1A Member 1) ELISA Kit人乳酸脱氢酶A(LDHA)试剂盒
假单胞菌属白抗原CD97 alpha 抗体Human MMP-24(Matrix Metalloproteinase 24) ELISA Kit人乳清酸磷酸核糖转移(OPRT)试剂盒
更新世肉杆菌紧密连接蛋白2抗体Human MANF(Mesencephalic Astrocyte Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit人乳过氧化物酶(LPO)试剂盒
淋病奈瑟菌紧密连接蛋白7抗体Human MAPK(Mitogen Activated Protein Kinase) ELISA Kit人肉瘤抗原1(SAGE1)试剂盒
海南油脂酵母2号染色体开放阅读框53抗体Human MMP-25(Matrix Metalloproteinase 25) ELISA Kit人肉碱O-棕榈酰基转移酶1,肝亚型(CPT1A/CPT1)试剂盒
大肠埃希氏菌2号染色体开放阅读框54抗体Human MMRN1(Multimerin 1) ELISA Kit人肉碱试剂盒
哈茨木霉2号染色体开放阅读框56抗体Human KERA(KeRatocan) ELISA Kit人肉碱脂酰转移酶(CACT)试剂盒
热脱氮地芽孢杆菌热脱氮亚种2号染色体开放阅读框61抗体Human LZMg(Lysozyme G) ELISA Kit人肉碱O -乙酰基转移酶(CRAT/CAT1)试剂盒
茯苓癌相关抗原抗体Human LAMA4(Laminin Alpha 4) ELISA Kit人溶血血小板活化因子(lyso-PAF)试剂盒
枯草芽孢杆菌分裂周期相关蛋白4抗体Human LAT(Linker For Activation of T-cell) ELISA Kit人溶酶体相关膜蛋白2(HLAMP-2)试剂盒
新疆糖丝菌色素b5抗体Human LACTβ(β-Lactamase) ELISA Kit人溶菌酶(LZM)试剂盒
球孢白僵菌钙粘蛋白相关的神经受体2抗体Human LDL(Low Density Lipoprotein) ELISA Kit人绒毛膜促性腺(HCG)试剂盒
禽腺病1号染色体开放阅读框186抗体Human LCA/CD45(Leukocyte Common Antigen) ELISA Kit人相关血浆蛋白A(PAPP-A)试剂盒
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磷酸化G氨丁酸B型受体2抗体phospho APP(pThr668)/FITC 荧光素标记抗磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体IgG