使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 人核糖核酸酶P 检测试剂盒(荧光PCR法)(ROX)
规格: 50T
货号:BH-P64086
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
秦氏蜜环菌肿瘤标志物CYFRA21-1抗体Human FDP(Fibrinogen Degradation Product) ELISA Kit人凝血酶原片段F1+2(F1+2)试剂盒
产紫青霉磷酸化原癌基因c-Jun抗体Human POTEG(POTE Ankyrin Domain Family Member G) ELISA Kit人凝血酶血栓调节蛋白复合物(T-TM)试剂盒
香菇周期素A1蛋白抗体Human POTE-D(POTE-D(POTE Ankyrin Domain Family Member D)) ELISA Kit人凝血酶受体(TR)试剂盒
太平洋大洋杆状菌周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白3抗体Human FETUB(Fetuin B) ELISA Kit人凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)试剂盒
坚脆嗜热子囊菌角蛋白42Human FG(Fibrinogen) ELISA Kit人凝血酶(Thrombin)试剂盒
环状芽胞杆菌CD105抗体Human FcγR3B(Fc Fragment of IgG Low Affinity IIIb Receptor) ELISA Kit人凝溶胶蛋白(Gelsolin)试剂盒
德氏乳杆菌保加利亚亚种半胱酸蛋白酶蛋白-7抗体Human fFDFT1(Farnesyl Diphosphate Farnesyltransferase 1) ELISA Kit人凝聚素(CLU)试剂盒
鲜绿青霉CD8/CD8-β抗体Human FDP(Fibrinogen Degradation Product) ELISA Kit人柠檬酸合成酶,线粒体(CS)试剂盒
金龟子绿僵菌*周期蛋白依赖性激酶CABLES2抗体Human POTEG(POTE Ankyrin Domain Family Member G) ELISA Kit人尿微量白蛋白(MAU/ALB)试剂盒
平菇兔抗鸡IgY抗体Human POTE-E(POTE-E(POTE Ankyrin Domain Family Member E)) ELISA Kit人尿素酶相关蛋白C(UreC)试剂盒
假单胞菌属20号染色体开放阅读框128抗体Human FETUB(Fetuin B) ELISA Kit人尿皮素试剂盒
腐皮镰孢菌色素P450ⅡE1抗体Human POTE-D(POTE-D(POTE Ankyrin Domain Family Member D)) ELISA Kit人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)试剂盒
黑曲霉B-趋化因子抗体Human fFDFT1(Farnesyl Diphosphate Farnesyltransferase 1) ELISA Kit人尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)试剂盒
毛韧革菌分裂周期蛋白23抗体Human FAIM3(Fas Apoptotic Inhibitory Molecule 3) ELISA Kit人尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)试剂盒
莫哈韦芽孢杆菌结肠和肝肿瘤高表达蛋白抗体Human FAPα(Fibroblast Activation Protein Alpha) ELISA Kit人尿激酶(UK)试剂盒
枯草芽孢杆菌周期蛋白依赖性激酶调节亚基1抗体Human FG(Fibrinogen) ELISA Kit人尿苷二磷酸葡萄糖神经酰葡萄糖基转移酶(UGCG)试剂盒
人核糖核酸酶P 检测试剂盒(荧光PCR法)(ROX)肿瘤/抗原2.3抗体T细胞表面糖蛋白CD3 epsilon链(CD3E/T3E)检测试剂盒CD3E/T3E ELISA Kit
肿瘤/抗原2.4抗体T细胞白血病同源盒蛋白1(Tlx1/Hox11/Tlx-1)检测试剂盒Tlx1/Hox11/Tlx-1 ELISA Kit
脑钠素/利钠肽抗体Toll样受体9(TLR-9/CD289)检测试剂盒TLR-9/CD289 ELISA Kit
B Raf抗体Toll样受体7(TLR7)检测试剂盒TLR7 ELISA Kit
癌易感因1抗体Toll样受体5(TLR-5)检测试剂盒TLR-5 ELISA Kit
癌易感因2抗体TGF-β诱导早期因1(TIEG1)检测试剂盒TIEG1 ELISA Kit
溴脱氧尿苷抗体Tau蛋白(TAU)检测试剂盒TAU ELISA Kit
B迁移因2抗体Slit2(Slit2)检测试剂盒Slit2 ELISA Kit
骨形态发生蛋白2抗体SCAF11蛋白(SFRS2IP/CASP11)检测试剂盒SFRS2IP/CASP11 ELISA Kit
胶质母瘤相关蛋白GBAS抗体Phospho-PAK4 (Ser474)/PAK5 (Ser602)/PAK6 (Ser560) /FITC 荧光素标记磷酸化p21激活激酶4、5、6抗体IgG
红糖苷α1抗体PAK7/PAK5/MBT/FITC 荧光素标记抗激活激酶PAK7/PAK5抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。