使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 狗种特异性基因检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64093
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合��关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
![](https://yt.yzimgs.com/ComFolder/200132334/image/202108/202108051515218291.png)
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
地衣芽孢杆菌4号染色体开放阅读框22抗体Human CK-18/KRT18(CytokeRatin 18) ELISA Kit人硫氧还蛋白依赖性过氧化物还原酶,线粒体(PRDX3)试剂盒
阿舒假囊酵母4号染色体开放阅读框14抗体Human CK-20/KRT20(CytokeRatin 20) ELISA Kit人硫氧还蛋白还原酶(TrxR)试剂盒
米曲霉X染色体开放阅读框21抗体Human CYP2A6(Cytochrome P450 2A6) ELISA Kit人硫氧还蛋白,线粒体(TXN2)试剂盒
泡盛曲霉变种磷酸化C端结合蛋白1抗体Human CYPA(Cyclophilin A) ELISA Kit人硫氧化还原蛋白(Trx)试剂盒
植物乳杆菌钙粘附蛋白8抗体Human CYPB(Cyclophilin B) ELISA Kit人硫酸乙酰肝素蛋白多糖2(HSPG2)试剂盒
核盘菌8号染色体开放阅读框192抗体Human CYSLTR2(Cysteinyl Leukotriene Receptor 2) ELISA Kit人硫酸褪黑色素(MS)试剂盒
溶血不动杆菌21号染色体开放阅读框87抗体Human DGAT1(Diacylglycerol O-acyltransferase 1) ELISA Kit人硫酸软骨素蛋白聚糖5(CSPG5)试剂盒
短稳杆菌21号染色体开放阅读框91抗体Human D2R/DRD2(Dopamine Receptor D2) ELISA Kit人硫酸软骨素N-乙酰氨半乳糖基转移酶1(CSGALNACT1)试剂盒
异常汉逊酵母22号染色体开放阅读框25抗体Human DAG1(Dystrophin Associated Glycoprotein 1) ELISA Kit人硫酸软骨素(CS)试剂盒
枯草芽孢杆菌20号染色体开放阅读框196抗体Human DAT(Dopamine Transporter) ELISA Kit人硫酸皮肤素-硫酸软骨素PG(DSCSPG)试剂盒
黑根霉5号染色体开放阅读框35抗体Human CKLF(Chemokine Like Factor) ELISA Kit人硫酸皮肤素(DS)试剂盒
酿酒酵母20号染色体开放阅读框194抗体Human DAP6(Death Associated Protein 6) ELISA Kit人硫酸脑苷酯(SFT)试剂盒
米根霉4号染色体开放阅读框32抗体Human CKLFSF6(Chemokine Like Factor Superfamily 6) ELISA Kit人硫酸类肝素(HS/HPS)试剂盒
枯草芽孢杆菌枯草亚种5号染色体开放阅读框20抗体Human CKMT1A(Creatine Kinase, Mitochondrial 1A) ELISA Kit人硫酸角质素(KS)试剂盒
美澳型核果褐腐病菌胱抑素D/半胱氨酸蛋白酶抑制剂D抗体Human CLDN11(Claudin 11) ELISA Kit人硫酸雌酮(E1S)试剂盒
亚拉巴马全缘孔菌胱抑素8/半胱氨酸蛋白酶抑制剂8抗体Human CLDN1(Claudin 1) ELISA Kit人硫嘌呤S-甲基转换酶(TPMT)试剂盒
狗种特异性基因检测试剂盒(荧光PCR法)肿瘤坏死因子配体超家族成员18抗体乙香芹酯/2--5-(2-烯)-2-环己烯-1-乙酯 CARVYLACETATE, (-)-(RG)Human
肿瘤坏死因子受体超家族成员14抗体(-)-香芹 CARVONE, (-)-(AS)Human, Mouse, Rat
磷化血管**素受体2抗体(+)-香芹 CARVONE, (+)-(SG)Human, Mouse, Rat
转化生长因子β活化激酶1葛缕 CARVEOL (RG)Human
磷化转化生长因子β活化激酶1葛缕 CARVEOL (RG)Human, Mouse
磷化转化生长因子β活化激酶1香芹乙酯 CARVACRYL ACETATE(RG)Human, Mouse
磷化转化生长因子β活化激酶1香芹乙酯 CARVACRYL ACETATE(RG)Human, Mouse, Rat
磷化血管**素受体2抗体香芹酚 CARVACROL(ISOTHYMOL)(P)Human, Mouse
磷化色氨羟化酶抗体香芹酚 CARVACROL(ISOTHYMOL)(P)Human
磷酸化G蛋白激活内向通道1抗体phospho-c-Raf (Ser338) /FITC 荧光素标记磷酸化原癌因c-Raf抗体IgG
G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2抗体phospho C-Myc(pThr58/pSer62)/FITC 荧光素标记抗磷酸化致癌因C-Myc抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。