使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 马种特异性基因检测试剂盒(荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64096
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
![](https://yt.yzimgs.com/ComFolder/200132334/image/202108/202108051515218291.png)
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
乳杆菌属脊髓灰质炎受体相关蛋白1抗体Human CAMK2N2(Calcium/Calmodulin Dependent Protein Kinase II Inhibitor 2) ELISA Kit人磷酸化乙酰辅酶A(PaCoA)试剂盒
黄色篮状菌19号染色体开放阅读框73抗体Human CAMK2α(Calcium/Calmodulin-Dependent Protein Kinase II Alpha) ELISA Kit人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)试剂盒
果生链核盘菌整合素αM抗体Integrin αMHuman CAPS(Calcyphosine) ELISA Kit人磷酸化外信号调节激酶(pERK)试剂盒
浸麻类芽胞杆菌轴突蛋白4/少突胶质抗体Human CAPN1(calpain 1) ELISA Kit人磷酸化糖原合成酶激酶3(pGSK-3)试剂盒
草酸青霉轴突相关CNTP2蛋白抗体(少突胶质)Human CASP10(Caspase 10) ELISA Kit人磷酸化肌球蛋白轻链(PMLC)试剂盒
黄曲霉酪蛋白激酶δ1抗体Human CaN(Calcineurin) ELISA Kit人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)试剂盒
酿酒酵母活化白粘附分子抗体Human CASP4(Caspase 4) ELISA Kit人磷酸化蛋白激酶B(P-PKB)试剂盒
肠杆菌1号染色体开放阅读框191抗体Human C4(Complement Component 4) ELISA Kit人趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)试剂盒
链格孢菌柯萨奇病A16型聚合酶3DHuman C4BPβ(C4 Binding Protein Beta) ELISA Kit人抗原6复合物基因座A(Ly6a)试剂盒
橙色杆孢囊菌睫状神经营养因子抗体Human C4BPα(C4 Binding Protein Alpha) ELISA Kit人功能相关抗原3(LFA-3/CD58)试剂盒
大肠杆菌角蛋白16抗体Human C4d(Complement Fragment 4d) ELISA Kit人功能相关抗原2(LFA-2/CD2)试剂盒
长枝木霉4号染色体开放阅读框17抗体Human C/EBPα(CCAAT/Enhancer Binding Protein Alpha) ELISA Kit人亮氨酰-半胱氨酰氨肽酶(LNPEP)试剂盒
马来西亚链霉菌质脆性X智力低下蛋白结合蛋白2抗体Human C/EBPβ(CCAAT/Enhancer Binding Protein Beta) ELISA Kit人亮氨酸富含重复丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(LRRK2)试剂盒
平菇胸腺基质**素受体抗体Human C1INH(Complement 1 Inhibitor) ELISA Kit人亮氨酸氨基肽酶3(LAP3)试剂盒
产气荚膜梭菌 素C型角蛋白12抗体Human C1q-Ab(Anti-Complement 1q Antibody) ELISA Kit人链激酶(SK)试剂盒
微杆菌谷氨酸半胱氨酸γ合成酶抗体Human C1q(Complement 1q) ELISA Kit人连蛋白(zonulin)试剂盒
马种特异性基因检测试剂盒(荧光PCR法)肿瘤抑制因P53蛋白抗体(野生型P53)醋磺米隆 Potassium trichloroammineplatinate(II)
肿瘤抑制因p63α抗体醋优力司特;醋乌利司他 Sisomicin
磷二酯酶4A8抗体醋增血压素 spectinomycin
血小板源性生长因子AB+BB抗体地克珠利 5-MTHF;5-Methyltetrahydrofolic Acid Calcium Salt Trihydrate
增殖核抗原抗体地拉考昔 Kitasamycin
脑特异性多肽蛋白19抗体地拉罗司,去铁斯若 josamycin
三磷腺苷门控阳离子通道蛋白抗体地马格列 Midecamycin Acetate
硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ/巯抗氧化蛋白抗体地美司钠 Etimicin
p53凋亡相关作用蛋白PMP22抗体地美溴 Paromomycin
甘油激酶2抗体phospho-c-Jun (Ser63) /FITC 荧光素标记磷酸化原癌因c-Jun抗体IgG
β-半乳糖苷酶1/β-Gal/弹性蛋白受体1抗体phospho-MEK1/MAPKK1(pSer298)/FITC 荧光素标记抗磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶1抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。