PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: BAR基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
货号:BH-P64121
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
酿酒酵母血栓素合成酶抗体Human AQP9(Aquaporin-9) ELISA Kit人甲状腺激球蛋白(TSI)试剂盒
粘状曲霉多癌基因下调蛋白抗体Human AKR1B1(Aldose reductase) ELISA Kit人甲状旁腺相关蛋白(PTHrP)试剂盒
白僵菌色素C氧化酶蛋白5B抗体Human ADIPOR1(Adiponectin receptor protein 1) ELISA Kit人甲状旁腺1受体(PTH1R)试剂盒
玫瑰考克氏菌色素C氧化酶亚基3抗体Human GP6(Plaet glycoprotein VI) ELISA Kit人甲状旁腺1-34(PTH 1-34)抗体试剂盒
栖热菌属色素C氧化酶亚基6B抗体Human SOD3(Extracellular superoxide dismutase [Cu-Zn]) ELISA Kit人甲状旁腺1-34(PTH 1-34)试剂盒
紫红曲霉磷酸化致癌基因C-Myc抗体Human PRDX1(Peroxiredoxin-1) ELISA Kit人甲状旁腺(PTH)试剂盒
枯草芽孢杆菌磷酸化致癌基因C-Myc抗体Human LPCAT3(Lysophospholipid acyltransferase 5) ELISA Kit人甲酰甲硫氨酸(fMet)试剂盒
短裙竹荪1-2色素P450 11B1抗体Human OXM(Oxyntomodulin) ELISA Kit人甲肟前列腺素D2(PGD2-MOX)试剂盒
丽齿菌属环磷酸鸟苷抗体Human SMAD2(Mothers against decapentaplegic homolog 2) ELISA Kit人甲基化DNA[蛋白]半胱氨酸S甲基转移酶试剂盒
多主葡萄壳菌内皮因子维生素B12受体抗体Human WNT3A(Protein Wnt-3a) ELISA Kit人甲基化CpG结合蛋白2(MECP2)试剂盒
喜盐裸囊菌原癌基因cMAF抗体Human Smad3/MADH3(Mothers Against Decapentaplegic Homolog 3) ELISA Kit人脊髓灰质炎病抗原(PV)试剂盒
沙链霉菌18号染色体开放阅读框56抗体Human RPESP(RPE-spondin) ELISA Kit人脊髓灰质炎病(PV)抗体(IgG)试剂盒
葡萄座腔菌3号染色体开放阅读框22抗体Human SEMA3G(Semaphorin-3G) ELISA Kit人己糖激酶3(HK3)试剂盒
出芽短梗霉19号染色体开放阅读框46抗体Human OXM(Oxyntomodulin) ELISA Kit人己糖激酶(HK)试剂盒
微型离心机 (便携式)原癌基因cMAF抗体Human WNT3A(Protein Wnt-3a) ELISA Kit人几丁质酶3样蛋白1(YKL-40/CHI3L1)试剂盒
产氨短杆菌电压依赖性钙通道Cav2.1抗体Human Smad3/MADH3(Mothers Against Decapentaplegic Homolog 3) ELISA Kit人几丁质酶1(壳三糖酶)(CHIT1)试剂盒
BAR基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)猪去氧胆(标准品)Human, Mouse, Rat
猪牙皂(标准品)Human, Mouse
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紫草(新疆紫草)(标准品)Human, Mouse
紫草呋喃AHuman, Mouse
γ氨丁酸γ2受体/GABAA Rγ2抗体Phospho-PRK1 (Thr774)/PRK2 (Thr816) /FITC 荧光素标记磷酸化***腺衍生血管内皮生长因子抗体IgG
磷酸化糖原合酶激酶3β抗体HSP-90 Alpha/HRP 辣根过氧化物酶标记热休克蛋白90α抗体IgG