使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: CTP2-CP4-EPSPS基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
货号:BH-P64124
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
酿酒酵母氯霉素单克隆抗体Human ALAD(Delta-aminolevulinic acid dehydRatase) ELISA Kit人基质γ羧基谷氨酸蛋白(MGP)试剂盒
维罗纳假单胞菌CD98重链抗原抗体Human QPCT(Glutaminyl-peptide cyclotransferase) ELISA Kit人基膜聚糖/内腔蛋白(LUM)试剂盒
平脐蠕孢菌钙蛋白酶抑制蛋白抗体Human DDOST(Dolichyl-diphosphooligosaccharide–protein glycosyltransferase 48 kDa subunit) ELISA Kit人肌质/内质网钙ATP酶(ATP2A1)试剂盒
金黄色葡萄球菌cGMP依赖性蛋白激酶1抗体Human KISS1(Metastasis-suppressor KiSS-1) ELISA Kit人肌抑素(MSTN)试剂盒
玻利维亚盐单胞菌胞浆钙独立磷脂酶A2抗体Human 4-HNE(4-Hydroxynonenal) ELISA Kit人肌养蛋白(dystrophin)试剂盒
草生链霉菌1号染色体开放阅读框98抗体Human PDPN(Podoplanin) ELISA Kit人肌**素(MYOG)试剂盒
金顶侧耳、榆黄磨、金顶磨COX4NB蛋白抗体Human MCL1(Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1) ELISA Kit人肌酸激酶同工酶MM(CK-MM)试剂盒
葡萄座腔菌肿瘤/抗原77抗体Human ADAMTS9(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 9) ELISA Kit人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)试剂盒
适宜剑菌CD81抗体Human ADAMTS5(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5) ELISA Kit人肌酸激酶同工酶BB(CK-BB)试剂盒
鸡枞(鸡菌)辅酶Q10B抗体Human MEFV(Pyrin) ELISA Kit人肌肉骨骼受体酪氨酸激酶抗体(MUSK Ab)试剂盒
假单胞菌属因子受体样因子1抗体Human UCP1(Mitochondrial brown fat uncoupling protein 1) ELISA Kit人肌球蛋白轻链激酶(MLCK)试剂盒
糙孢篮状菌半胱氨酸亚磺酸脱羧酶抗体Human UCP2(Mitochondrial uncoupling protein 2) ELISA Kit人肌球蛋白(MYS)试剂盒
科赫芽胞杆菌型肝炎NS2反式调节蛋白/衰老相关的基因10蛋白抗体Human COQ10B(Coenzyme Q-binding protein COQ10 homolog B, mitochondrial) ELISA Kit人肌强直蛋白蛋白激酶(DMPK)试剂盒
平菇固酮合成酶CYP11B2抗体Human LRP1(Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1) ELISA Kit人肌联蛋白(TTN)抗体试剂盒
酿酒酵母分裂周期蛋白8抗体Human LRP1(Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1) ELISA Kit人肌腱蛋白R(TN-R)试剂盒
米川黄杆菌卷曲螺旋结构域蛋白5抗体Human MEFV(Pyrin) ELISA Kit人肌红蛋白(MYO/MB)试剂盒
CTP2-CP4-EPSPS基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)转录激活蛋白CRSP9抗体盐艾司洛尔 Kitasamycin
神经网蛋白CopineVI抗体盐 Latanoprost
脑型肉棕榈酰转移酶1C抗体盐巴尼地平 Lenalidomide
补体因子B抗体盐贝那普利/苯那普利 Lenalidomide
乙酰胆受体前体蛋白AChRα1抗体盐贝尼地平 Letrozole
猪瘟病包膜糖蛋白E2抗体盐地尔硫卓 Letrozole
冷休克结构域蛋白C2抗体盐丁咯地尔 Leuprorelin Acetate (Leuprolide Acetate)
碳酐酶10抗体盐多巴酚丁 Levetiracetam
L选择素抗体盐氟桂利 Levetiracetam
磷酸化GATA结合蛋白6抗体Plectin/FITC 荧光素标记网蛋白抗体IgG
磷酸化γ氨丁酸γ2受体/GABAA Rγ2抗体PLAUR/uPAR/FITC 荧光素标记尿激酶型纤溶酶原激活因子受体抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。