使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: tCaMV35S基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
货号:BH-P64127
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使���应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
![](https://yt.yzimgs.com/ComFolder/200132334/image/202108/202108051515218291.png)
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
炭黑曲霉9号染色体开放阅读框174抗体Human HPX(Hemopexin) ELISA Kit人黑色素瘤试剂盒
大肠埃希氏菌6号染色体开放阅读框64抗体Human TLR5(Toll-like receptor 5) ELISA Kit人黑色素试剂盒
类芽孢杆菌属球蛋白G Fc段受体Ⅱ抗体Human PRKACB(cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit beta) ELISA Kit人核因子κB抑制物激酶β(IKK-β)试剂盒
亚细亚菌属透明质酸介导游走受体抗体Human ARRB2(Beta-arrestin-2) ELISA Kit人核因子κB抑制物激酶α(IKK-α)试剂盒
东方伊萨酵母周期素样Y1抗体Human CNN1(Calponin-1) ELISA Kit人核因子κB(NF-κB)试剂盒
根瘤菌周期素J抗体Human ProHAMP(Hepcidin prohormone) ELISA Kit人核心结合因子α1,CBFA1/RUNX2 试剂盒
青紫链霉菌周期素L抗体Human MMP28(Matrix metalloproteinase-28) ELISA Kit人核心蛋白聚糖(DCN)试剂盒
北方蜜环菌补体C1RL链多肽抗体Human CBS(Cystathionine beta-synthase) ELISA Kit人核糖体合成蛋白NSA2同源物(NSA2)试剂盒
酿酒酵母周期素M2抗体Human ADAMTS7(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 7) ELISA Kit人核糖体蛋白S9(RPS9)试剂盒
链霉菌周期素T2抗体Human EDA(Ectodysplasin-A) ELISA Kit人核糖体蛋白S25(RPS25)试剂盒
白地霉周期素K抗体Human TNC(Tenascin) ELISA Kit人核糖核酸抑止剂(RNH1/PRI/RNH)试剂盒
天蓝褐链霉菌**肽CAMP抗体Human IL36A(Interleukin-36 alpha) ELISA Kit人核糖核酸酶,核糖核酸酶A家族,(肝脏,嗜酸性粒源性神经素)(RNASE2)试剂盒
酿酒酵母5号染色体开放阅读框4抗体Human HPX(Hemopexin) ELISA Kit人核糖核酸酶(RNASE1/RIB1/RNS1)试剂盒
大肠埃希菌4号染色体开放阅读框44抗体Human MAPT(Microtubule-associated protein tau) ELISA Kit人核仁纤维蛋白抗体(AFA/snoRNP/U3RNP)试剂盒
胶孢4号染色体开放阅读框33抗体Human TLR5(Toll-like receptor 5) ELISA Kit人核基质蛋白22(NMP-22)试剂盒
pET-23a4号染色体开放阅读框42抗体Human PRKACB(cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit beta) ELISA Kit人核黄素激酶(RFK)试剂盒
tCaMV35S基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)转录调节因子C/EBP β抗体硫新霉素(标准品) Megestrol base
CREB结合蛋白抗体硫粘杆菌素(标准品) Estradiene dione-3-keta
嗜粒趋化蛋白抗体硫辛(标准品) Sorafenib base
黑色素瘤粘附分子CD146抗体硫唑嘌呤(标准品) Histamine phosphate
磷化周期素E抗体硫唑嘌呤杂质(标准品) Chloroquine diphosphate
α-s2酪蛋白抗体柳酚,利胆酚(标准品) (-)-Hyoscyamine
组织蛋白酶B抗体六氟异(标准品) (-)-Hyoscyamine
CXCL10趋化因子10/干扰素诱导蛋白10抗体六蜜(标准品) Dextran D70
CXC趋化因子14抗体苯灵(标准品) Dextran D40
G蛋白β1抗体/鸟嘌呤核苷酸结合蛋白β亚1PLG/FITC 荧光素标记纤维蛋白溶酶原抗体IgG
G蛋白β3抗体/鸟嘌呤核苷酸结合蛋白β亚3PLGF/FITC 荧光素标记胎盘生长因子抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。