使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 转基因玉米品系3272检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
货号:BH-P64137
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性��
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
类芽孢杆菌属半胱酸蛋白酶蛋白9-p10抗体Human FNDC5(Fibronectin type III domain-containing protein 5) ELISA Kit人富组蛋白(histatin-5)试剂盒
枯草芽孢杆菌C型凝集素结构域家族5成员A抗体Human PLK1(Serine/threonine-protein kinase PLK1) ELISA Kit人富组氨酸糖蛋白(HRG)试剂盒
高地芽胞杆菌 周期素依赖激酶1抗体Human NR3C1(Glucocorticoid receptor) ELISA Kit人富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)试剂盒
耐冷冷杆菌衰老抑制基因抗体Human NDUFS8(NADH dehydrogenase [ubiquinone] iron-sulfur protein 8, mitochondrial) ELISA Kit人富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61/CCN1)试剂盒
链霉菌环腺苷酸应答元件结合蛋白抗体Human NDUFS7(NADH dehydrogenase [ubiquinone] iron-sulfur protein 7, mitochondrial) ELISA Kit人副肿瘤性天疱疮(PNP)抗体试剂盒
黄皮疣柄牛肝菌酪蛋白激酶1γ1抗体Human PRAP1(Proline-rich acidic protein 1) ELISA Kit人复制蛋白A(RPA-70)试剂盒
篱边粘褶菌21号染色体开放阅读框88抗体Human CXCL14(C-X-C motif chemokine 14) ELISA Kit人附睾蛋白4(HE4)试剂盒
绿色木霉=木素木霉21号染色体开放阅读框54抗体Human SDCCAG3(Serologically defined colon cancer antigen 3) ELISA Kit人辅酶Q10(CoQ10)试剂盒
暗孢节菱孢菌周期检测点激酶2抗体Human NR3C1(Glucocorticoid receptor) ELISA Kit人脯氨酸肽酶(PEPD)试剂盒
韩国梅奇酵母周期素依赖性激酶9抗体Human PTMA(Prothymosin alpha) ELISA Kit人脯氨酸羟化酶(PHD)试剂盒
金龟子绿僵菌分裂周期蛋白6抗体Human DSCR6(Protein ripply3) ELISA Kit人脯氨酸/谷氨酰富含性剪接因子(SFPQ)试剂盒
短芽胞杆菌周期调控因子34Human CYP2C9(Cytochrome P450 2C9) ELISA Kit人封闭蛋白4(CLDN4)试剂盒
绿色木霉转录调节因子C/EBP β抗体Human FCGBP(IgGFc-binding protein) ELISA Kit人分泌性白蛋白酶抑制因子(SLPI)试剂盒
扩展青霉CREB结合蛋白抗体Human LY6G6F(Lymphocyte antigen 6 complex locus protein G6f) ELISA Kit人分泌型球蛋白A(SIgA)试剂盒
姬菇嗜酸粒趋化蛋白抗体Human HLA-E(HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E) ELISA Kit人分泌型磷脂酶A2(sPLA2)试剂盒
黑色素瘤粘附分子CD146抗体Human PIBF(Progesterone-induced-blocking factor) ELISA Kit人分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)试剂盒
转基因玉米品系3272检测试剂盒(PCR-荧光探针法)转录因子Gli4/锌指蛋白gli4抗体人参皂苷Rb2(标准品) Zirconocene Dichloride
麦角蛋白抗体人参皂苷Rb3(标准品) Chirabite-AR
胶质瘤发病相关蛋白1抗体人参皂苷Rc(标准品) Tris(2,2,6,6-tetramethyl-3,5-heptanedionato)praseodymium(III)
糖转移酶25结构域1/前胶原半乳糖转移酶1抗体人参皂苷Rd(标准品) Tris(2,2,6,6-tetramethyl-3,5-heptanedionato)europium(III)
谷氨酰酰水解酶抗体人参皂苷Rd2(标准品) Tris(6,6,7,7,8,8,8-heptafluoro-2,2-dimethyl-3,5-octanedionato)praseodymium(III)
糖转移酶25结构域2/前胶原半乳糖转移酶2抗体人参皂苷Re(标准品) (S)-(+)-1,1'-Binaphthyl-2,2'-diyl Hydrogen Phosphate
糖转移酶28家族1抗体人参皂苷Rf(标准品) (R,R)-(-)-2,3-Butanediol
糖转移酶6结构1抗体人参皂苷Rg1(标准品) (S,S)-(+)-2,3-Butanediol
胶质瘤抑癌候选因2抗体人参皂苷Rg2(标准品) (-)-Camphanic Acid
高尔体外周膜蛋白p65抗体PTPN4/MEG1/FITC 荧光素标记蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型4抗体IgG
核因子GCNF/维酸受体相关受体抗体PPAR-delta /FITC 荧光素标记D型-过氧化酶活化增生受体抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。