PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 转基因玉米品系MON89034检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
货号:BH-P64140
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水�� 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
金针菇组织蛋白酶G抗体Human RAG1(V(D)J recombination-activating protein 1) ELISA Kit人法尼基二磷酸法尼基转移酶1(FDFT1)试剂盒
解脂盐红菌激分子B7-1蛋白抗体Human DUT(Deoxyuridine 5′-triphosphate nucleotidohydrolase, mitochondrial) ELISA Kit人法尼X受体(FXR)试剂盒
鸭疫里氏杆菌1号染色体开放阅读框145抗体Human SCARB1(Scavenger receptor class B member 1) ELISA Kit人二酰基甘油(DAG/DG)试剂盒
南类芽孢杆菌20号染色体开放阅读框186抗体Human NFATC1(Nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 1) ELISA Kit人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)试剂盒
猬木霉角蛋白7抗体Human HTN3(Histatin-3) ELISA Kit人二氢嘧啶脱氢酶[NADP+](DPYD)试剂盒
溶血不动杆菌基因型4间隙连接蛋白26抗体Human SRD5A1(3-oxo-5-alpha-steroid 4-dehydrogenase 1) ELISA Kit人二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)试剂盒
贝伦格葡萄座腔菌膜辅蛋白抗体Human EPCA2(Early Prostate Cancer Antigen 2) ELISA Kit人二氢嘧啶酶样2(DPYSL2)试剂盒
鸭疫里氏杆菌F肌动蛋白α1亚基抗体Human MADCAM1(Mucosal addressin cell adhesion molecule 1) ELISA Kit人二羟基赖正己氨酸(DHLNL)试剂盒
抗生链霉菌CD8抗体Human NEO1(Neogenin) ELISA Kit人二磷酸腺苷(ADP)试剂盒
黄杆菌CD8抗体Human NAIP(Baculoviral IAP repeat-containing protein 1) ELISA Kit人二磷酸尿核苷葡糖酸基转移酶2家族肽B4(UGT2B4)试剂盒
小孢根霉原变种表面趋化因子受体2抗体Human PACRG(Parkin coregulated gene protein) ELISA Kit人二氧化酶(DAO)试剂盒
中慢生根瘤菌胱抑素B/半胱氨酸蛋白酶抑制剂B抗体Human CX3CR1(CX3C chemokine receptor 1) ELISA Kit人儿茶酚抑素试剂盒
溜曲霉趋化素样蛋白抗体Human JUP(Junction plakoglobin) ELISA Kit人儿茶酚(CA)试剂盒
多孢木霉角蛋白20抗体Human CFL1(Cofilin-1) ELISA Kit人鹅膏蕈碱试剂盒
苏云金芽胞杆菌钙激活的中性蛋白酶2抗体Human EPCA2(Early Prostate Cancer Antigen 2) ELISA Kit人多药耐药相关蛋白(MRP)试剂盒
臭曲霉CD45RO抗体Human IZUMO1(Izumo sperm-egg fusion protein 1) ELISA Kit人多效生长因子(PTN)试剂盒
转基因玉米品系MON89034检测试剂盒(PCR-荧光探针法)转录因子LBX1抗体苦参新F Pulchinenoside B
神经特异性转录因子LDB1抗体苦地丁(标准品) V
白化学吸引素2抗体苦鬼臼素 Mogroside IVa
LHX5蛋白抗体苦楝皮(标准品) isomogroside V
单丝氨蛋白激酶1+2抗体苦木(标准品) Sinomenine HCl
LIN7C蛋白抗体苦苏花皂苷C Sinomenine
富含亮氨重复序列Nogo受体反应蛋白4抗体苦杏仁(标准品) DNA.Na
富含亮氨α2糖蛋白抗体苦玄参(标准品) RNA
脑特异性磷脂磷酶样蛋白1抗体苦玄参苷IA(标准品) Uridine-5-diphosphoglucose disodium salt
转录因子Gli2抗体pRb/p105-Rb /FITC 荧光素标记磷酸化成视网膜瘤抑癌蛋白抗体IgG
转录因子Gli3抗体PRCP/FITC 荧光素标记脯氨酰羧肽酶抗体IgG