使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 转基因玉米品系CBH351检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
货号:BH-P64144
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实���;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
白地霉分裂周期相关蛋白Human RAB14(Ras-related protein Rab-14) ELISA Kit人低密度脂蛋白(LDL)试剂盒
卷枝毛霉灰蓝变型猪瘟病抗体Human TACR3(Neuromedin-K receptor) ELISA Kit人低分子质量蛋白7/β型蛋白酶体9(LMP7/PSMB9)试剂盒
大肠埃希氏菌16号染色体开放阅读框72抗体Human TAGLN3(Transgelin-3) ELISA Kit人登革热抗体IgM(DF-Ab IgM)试剂盒
发酵乳杆菌补体C4 γ 链蛋白抗体Human ATP7A(Copper-transporting ATPase 1) ELISA Kit人登革热抗体(DF-Ab)试剂盒
巴西曲霉补体C4d-A蛋白抗体Human NEDD9(Enhancer of filamentation 1) ELISA Kit人登革热(DF)抗体(IgG)试剂盒
黄色短杆菌补体C4b-A蛋白抗体Human HLA-DRB5(HLA class II histocompatibility antigen, DR beta 5 chain) ELISA Kit人的牛血清白蛋白(BSA)试剂盒
中慢生华癸根瘤菌磷酸化整合素β2/Integrin β2抗体Human S100A12(Protein S100-A12) ELISA Kit人蛋白质二硫键异构酶(PDI)试剂盒
孟氏假单胞菌磷酸化整合素β2/Integrin β2抗体Human MCTS1(Malignant T cell-amplified sequence 1) ELISA Kit人蛋白脂质蛋白抗体(PLP)试剂盒
大肠埃希菌4号染色体开放阅读框28抗体Human SLC25A4(ADP/ATP translocase 1) ELISA Kit人蛋白水解诱导因子/皮离蛋白(PIF/DCD)试剂盒
产气荚膜梭菌 素C型阳离子通道相关蛋白2抗体Human PLEKHO1(Pleckstrin homology domain-containing family O member 1) ELISA Kit人蛋白酶体(prosome,macropain)亚基,β型,2(PSMB2)试剂盒
单形拟杆菌阳离子通道相关蛋白3抗体Human GALC(Galactocerebrosidase) ELISA Kit人蛋白酶体(prosome,macropain)亚基,β型,1(PSMB1)试剂盒
长赤**液泡蛋白分选蛋白VPS13A抗体Human FAM214A(Protein FAM214A) ELISA Kit人蛋白酶激活复合体亚基2(PSME2)试剂盒
灵芝(红芝, 赤芝)钙调磷酸酶B相关蛋白2抗体Human SERPINB13(Serpin B13) ELISA Kit人蛋白酶3特异性抗中性粒胞质抗体(PR3-ANCA)试剂盒
轮枝孢CHRAC1蛋白抗体Human PTGDR(Prostaglandin D2 receptor) ELISA Kit人蛋白酶3抗体(PR3Ab)试剂盒
嗜根寡养单胞菌ATP依赖的解螺旋酶抗体Human ABCA7(ATP-binding cassette sub-family A member 7) ELISA Kit人蛋白酶3(PR3)试剂盒
多节孢属X染色体开放阅读框6抗体Human TCF3(Transcription factor E2-alpha) ELISA Kit人蛋白磷酸酶2(2A),催化亚基,β亚型(PPP2CB)试剂盒
转基因玉米品系CBH351检测试剂盒(PCR-荧光探针法)转铁蛋白受体2抗体(2R,3S)-3-(苯酰氨)-2-羟苯乙酯 (紫杉侧链) BENZYLOXYPHENYLISOSERINE ETHYLESTER,N-(P)Human, Mouse, Rat
肿瘤坏死因子受体超家族成员13B抗体异硫苄酯 BENZYL ISOTHIOCYANATE(SG)Human, Mouse, Rat
Toll样受体8抗体6-苄腺嘌呤 BENZYLAMINOPURINE, 6-(RG)Human, Mouse, Rat
胸腺素抗体6-苄腺嘌呤 BENZYLAMINOPURINE, 6-(RG)Human, Mouse, Rat
α微管蛋白乙酰转移酶1抗体肉桂苄酯 BENZYL CINNAMATE(P)Human, Mouse, Rat
TANC1蛋白抗体香柠檬烯 BERGAPTEN(SH)Human, Mouse, Rat
遗传性耳聋β-tectorin抗体香柠檬烯 BERGAPTEN(SH)Human
谷氨酰转酶2抗体香柠檬亭 BERGAPTEN(P)Human, Mouse, Rat
丝氨/苏氨蛋白激酶TNN13K抗体香柠檬亭 BERGAPTEN(P)Human, Mouse
G蛋白偶联受体64抗体pre-X protein(CT)/FITC 荧光素标记抗乙肝病pre-X蛋白抗体(C端)IgG
γ氨丁酸受体相关蛋白样1抗体PRMT1/FITC 荧光素标记蛋白质精氨酸转移酶1抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。