使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 转基因玉米品系5307检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
货号:BH-P64149
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
乳酸乳球菌白喉酰生物合成样蛋白2抗体Human UCN2(Urocortin-2) ELISA Kit人促肾上皮质释放(CRH)试剂盒
丛梗孢属Notch信号通路Delta样配体3抗体Human ITPA(Inosine triphosphate pyrophosphatase) ELISA Kit人促卵泡素(FSH)试剂盒
烬灰吸水链霉菌动力蛋白激活蛋白2抗体Human RAB8A(Ras-related protein Rab-8A) ELISA Kit人促甲状腺素受体(TSHR)抗体试剂盒
紫棕炭团菌视神经相关蛋白/早老素结合蛋白抗体Human NDRG1(Protein NDRG1) ELISA Kit人促甲状腺素受体(TSHR)试剂盒
弗氏链霉菌DHX螺旋酶抗体Human GBA(Glucosylceramidase) ELISA Kit人促甲状腺素释放(TRH)试剂盒
地衣芽孢杆菌转运蛋白DISP2抗体Human VSNL1(Visinin-like protein 1) ELISA Kit人促甲状腺素(TSH)试剂盒
劣质食用油鉴别速测包DNA聚合酶α2抗体Human OGG1(N-glycosylase/DNA lyase) ELISA Kit人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3(MAPKAPK3)试剂盒
肉梭菌 素A型*短链脱氢酶/还原酶家族7B抗体Human FASN(Fatty acid synthase) ELISA Kit人次氧化酶试剂盒
WAL 14507 [DSM 19850]膜二肽酶3抗体Human CA14(Carbonic anhydrase 14) ELISA Kit人雌酮(estrone,E1)试剂盒
假灰链霉菌双特异性磷酸酶13抗体Human RAP1GDS1(Rap1 GTPase-GDP dissociation stimulator 1) ELISA Kit人雌三(E3)试剂盒
嗜糖黄杆菌DIM-7蛋白抗体Human PLIN1(Perilipin-1) ELISA Kit人雌诱导蛋白PS2 试剂盒
双重轮丝链霉菌核糖核酸酶Dicer抗体Human ASRGL1(L-asparaginase) ELISA Kit人雌受体β(ESR2)试剂盒
顶青霉内皮和平滑肌衍生的神经纤毛蛋白抗体Human SOCS2(Suppressor of cytokine signaling 2) ELISA Kit人雌硫酸转移酶(SULT1E1)试剂盒
Nesterenkonia flava含锚蛋白重复序列-因子信号抑制物盒蛋白家族2抗体Human WNT1(Proto-oncogene Wnt-1) ELISA Kit人雌(E)试剂盒
酿酒酵母DNA连接酶1抗体Human SOCS1(Suppressor of cytokine signaling 1) ELISA Kit人雌二受体(ER)试剂盒
巴氏醋杆菌DHH蛋白抗体Human APEH(Acylamino-acid-releasing enzyme) ELISA Kit人雌二(E2)试剂盒
转基因玉米品系5307检测试剂盒(PCR-荧光探针法)状腺素(T4)黄柏(标准品)Human, Mouse
鱼类主要组织相容性复合体黄豆黄苷(标准品)Human
大鼠c-Jun氨末端激酶黄豆黄素(标准品)Human, Mouse
小鼠丝氨/苏氨蛋白磷酶黄独素B(标准品)Human
人血清促状腺素(TSH)黄腐Human
状腺球蛋白抗体(TG抗体)黄根(标准品)Human, Mouse, Rat
状腺微粒体抗体(TM抗体)黄花败酱甙C;牡丹草苷B(标准品)Human
胎蛋白定量(一/二步夹心法) 黄荆子(标准品)Human
胎蛋白定性黄精(滇黄精)(标准品)Human
GLCNE蛋白抗体PS-1/FITC 荧光素标记早老素蛋白-1抗体IgG
半乳糖凝集素9抗体PS-1/FITC 荧光素标记早老素蛋白-1抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。