使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 玉米内源基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
货号:BH-P64151
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
短乳杆菌DNA聚合酶γ抗体Human MNX1(Motor neuron and pancreas homeobox protein 1) ELISA Kit人超敏热休克蛋白60(HSP-60)试剂盒
大肠埃希氏菌死亡受体5抗体Human OTX2(Homeobox protein OTX2) ELISA Kit人超敏前列腺特异性抗原(PSA-U S)试剂盒
麦氏游动微菌桥粒芯糖蛋白4抗体Human PIK3CA(Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform) ELISA Kit人超敏C反应蛋白(hs-CRP)试剂盒
*蜜粘褶菌=革裥菌自然杀伤激活受体相关蛋白DAP12抗体Human S1PR1(Sphingosine 1-phosphate receptor 1) ELISA Kit人超磷酸化微管相关蛋白tau(hyper phosphorylated MAPT)试剂盒
黑曲霉自然杀伤激活受体相关蛋白DAP12抗体Human PIK3CD(Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit delta isoform) ELISA Kit人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)试剂盒
泡盛曲霉无精症缺失基因4抗体Human GPX2(Glutathione peroxidase 2) ELISA Kit人肠三叶因子(ITF)试剂盒
核侧耳多能发育相关基因4抗体Human AMELX(Amelogenin, X isoform) ELISA Kit人肠道病71型(EV71)抗体(IgM)试剂盒
真姬菇锌指蛋白DZIP1抗体Human APEH(Acylamino-acid-releasing enzyme) ELISA Kit人层粘连蛋白亚基γ-2(LAMC2)试剂盒
三叶草根瘤菌Notch信号通路Delta样配体1抗体Human STAB1(Stabilin-1) ELISA Kit人层粘连蛋白β1(LN-β1)试剂盒
侧孢短芽孢杆菌同源转录因子DLX1抗体Human SLC31A1(High affinity copper uptake protein 1) ELISA Kit人层粘连蛋白-5(LN-5)试剂盒
短芽孢杆菌Hsp90辅助伴侣分子CDC37抗体Human AGMAT(Agmatinase, mitochondrial) ELISA Kit人层连蛋白/板层素(LN)试剂盒
双孢蘑菇肌营养**蛋白抗体Human AKR1C1(Aldo-keto reductase family 1 member C1) ELISA Kit人布鲁氏菌抗体IgG(Brucella Ab IgG)试剂盒
枯草芽孢杆菌金属离子转运体1抗体Human ACLY(ATP-citRate synthase) ELISA Kit人布卢姆综合征蛋白(BLM)试剂盒
红色红曲抑癌蛋白DKK1抗体Human YRDC (YrdC domain-containing protein, mitochondrial) ELISA KIT人不对称二甲基精氨酸(ADMA)试剂盒
大肠埃希菌膜转运蛋白DISPA抗体Human ITIH5L(Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H5-like protein) ELISA Kit人补体因子I(CFI)试剂盒
黄叉曲霉DIRAS2蛋白抗体Human EFNA1(Ephrin-A1) ELISA Kit人补体因子H相关蛋白1(CFHR1)试剂盒
玉米内源基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)紫花前胡苷元Human
紫花前胡素Human, Mouse
紫金莲(标准品)Human, Mouse
紫金龙(标准品)Human
紫蓳灵(标准品)Human
紫荆皮(标准品)Human
紫萁(标准品)Human, Mouse
紫色姜(标准品)Human, Mouse
紫杉(标准品)Human, Mouse
高尔体膜蛋白GP73抗体PSAP/PAP/FITC 荧光素标记前列腺酸性磷酸酶抗体IgG
葡萄糖转运蛋白1抗体prox-1 /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠prox-1蛋白抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。