PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 沙门氏菌检测试剂盒(带内参,PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
货号:BH-P64165
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
Pseudoxanthomonas动力蛋白激活蛋白6抗体Human RERGL (Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor-like protein) ELISA KIT人α-黑色素(α-MSH)试剂盒
绒奥德蘑脱酶2抗体Human RASSF1 (Ras association domain-containing protein 1) ELISA KIT人α谷胱甘肽S转移酶(α-GST)试剂盒
斑点青霉磷酸化DNA依赖性蛋白激酶抗体Human RHEBL1 (GTPase RhebL1) ELISA KIT人α干扰素(IFN-α)试剂盒
耐寒短杆菌防御素α4抗体Human R3HCC1 (R3H and coiled-coil domain-containing protein 1) ELISA KIT人α-辅肌动蛋白4(ACTN-4)试剂盒
圈卷产色链霉菌DNA损伤结合蛋白1抗体Human SPDEF (SAM pointed domain-containing Ets transcription factor) ELISA KIT人α-辅肌动蛋白3(ACTN-3)试剂盒
炭疽健康皮张抗原DNA损伤结合蛋白2抗体Human RTBDN (Retbindin) ELISA KIT人α-辅肌动蛋白1(ACTN-1)试剂盒
凝结芽胞杆菌CD299抗体Human PEAK1 (Pseudopodium-enriched atypical kinase 1) ELISA KIT人α-防御素4(NP-4)试剂盒
巨大芽孢杆菌C型凝集素结构域家族4成员A抗体Human R3HDML (Peptidase inhibitor R3HDML) ELISA KIT人α淀粉酶(AMY1)试剂盒
雅致放射毛霉C型凝集素结构域家族6成员A抗体Human PTK2B (Protein-tyrosine kinase 2-beta) ELISA KIT人α半乳糖基(α-Gal)试剂盒
解淀粉芽孢杆菌B衔接分子DAPP1抗体Human RABGAP1 (Rab GTPase-activating protein 1) ELISA KIT人α半乳糖苷酶(αGAL)试剂盒
微小根毛霉DNA酶1样蛋白1抗体Human PINK1(Serine/threonine-protein kinase PINK1, mitochondrial) ELISA Kit人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)试剂盒
根瘤菌**蛋白DCD抗体Human PURB (Transcriptional activator protein Pur-beta) ELISA KIT人αL岩藻糖苷酶(AFU)试剂盒
毕赤酵母肌动蛋白解聚因子抗体Human REP15 (Rab15 effector protein) ELISA KIT人αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)试剂盒
斯瓦特贝赫山克里布所菌甘油二酯酰基转移酶2抗体Human RABIF (Guanine nucleotide exchange factor MSS4) ELISA KIT人α2抗纤溶酶(α2-AP)试剂盒
台湾根霉DHX15蛋白抗体Human PURG (Purine-rich element-binding protein gamma) ELISA KIT人α2巨球蛋白(α2-MG)试剂盒
顶孢头孢霉DIAPH2蛋白抗体Human RALGPS1 (Ras-specific guanine nucleotide-releasing factor RalGPS1) ELISA KIT人α2-HS糖蛋白(AHSG)抗体试剂盒
沙门氏菌检测试剂盒(带内参,PCR-荧光探针法)组蛋白H3K9转移酶4抗体红景天(标准品) PR171 intermedaite II
离子通道蛋白家族成员3抗体红景天苷(标准品) (alphaS)-alpha-[(4-Morpholinylacetyl)amino]benzenebutanoyl-L-leucyl-L-phenylalanine
角蛋白82抗体红景天素;草质素甙; Boc-HPh-Leu-Phe-Ome
20号染色体开放阅读框19抗体红芪(标准品) 5(6)-Carboxy-X- rhodamine; 5(6)-ROX
角膜蛋白多糖抗体红曲(特殊发酵)(标准品) 5-hydroxy-2-adamantanone
含赖氨卷曲螺旋蛋白1抗体荭草苷(标准品) Eszopiclone
激肽释放酶3/舒血管素3抗体厚朴(厚朴)(标准品) Eszopiclone
上皮锌指蛋白1, 2, 4抗体厚朴酚(标准品) Triamcinolone Acetonide Acetate
肠道内富含的Kruppel样因子/上皮锌指蛋白4抗体厚朴总酚(对照品) Halofuginone
α-半乳糖苷酶抗体Rad51/FITC 荧光素标记Rad51抗体IgG
蛋白偶联受体55抗体Rad52/FITC 荧光素标记Rad52抗体IgG