使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 副溶血性弧菌检测试剂盒(PCR-荧光探针法SN标准)
规格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
货号:BH-P64167
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚���酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产黄青霉双甲基精氨酸水解酶2抗体Human PAFAH1B1 (Plaet-activating factor acetylhydrolase IB subunit alpha) ELISA KIT人T表面糖蛋白CD1a(CD1A)试剂盒
绿色木霉D酪氨酸激酶衰减蛋白1抗体Human PSKH1 (Serine/threonine-protein kinase H1) ELISA KIT人T白血病病Ⅰ/II(HTLV-Ⅰ/II)抗体试剂盒
假单胞菌双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶3抗体Human LAMA3(Laminin subunit alpha-3) ELISA Kit人TU3A蛋白(TU3A)试剂盒
栓菌肌营养蛋白α抗体Human PPME1 (Protein phosphatase methylesterase 1) ELISA KIT人Trem样转录因子1(TREML1)试剂盒
三叶草根瘤菌多巴β羟化酶抗体Human PXDC1 (PX domain-containing protein 1) ELISA KIT人Traf2结合蛋白(T2BP)试剂盒
链霉菌抑癌基因抗体Human PCBP1(Poly(rC)-binding protein 1) ELISA Kit人Toll作用蛋白(TOLLIP)试剂盒
耐辐射奇球菌DNA甲基转移酶1抗体Human KCTD13 (BTB/POZ domain-containing adapter for CUL3-mediated RhoA degradation protein 1) ELISA KIT人Toll样受体9(TLR-9/CD289)试剂盒
考克氏菌DNA甲基转移酶-3α抗体Human PCGF1 (Polycomb group RING finger protein 1) ELISA KIT人Toll样受体7(TLR7)试剂盒
酿酒酵母DNA甲基转移酶-3β抗体Human PRDM1 (PR domain zinc finger protein 1) ELISA KIT人Toll样受体6(TLR6)试剂盒
番鸭细小病死亡受体3抗体Human PAQR5 (Membrane progestin receptor gamma) ELISA KIT人Toll样受体5(TLR5)试剂盒
绿毛壳死亡受体4抗体Human MOCOS(Molybdenum cofactor sulfurase) ELISA Kit人Toll样受体4(TLR4)试剂盒
单增李斯特氏菌精神分裂症易感基因抗体Human DHTKD1 (Probable 2-oxoglutarate dehydrogenase E1 component DHKTD1, mitochondrial) ELISA KIT人Toll样受体3(TLR3)试剂盒
河流杆菌蓬乱蛋白1抗体Human PROKR1 (Prokineticin receptor 1) ELISA KIT人Toll样受体2(TLR2)试剂盒
链格孢(可订购)肌Dystrobrevin β蛋白抗体Human PIPOX (Peroxisomal sarcosine oxidase) ELISA KIT人Toll样受体1(TLR1)试剂盒
孢小克银汉霉轮生变种异常凝血酶原/脱-γ-羧基凝血酶原抗体Human ADCYAP1(Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide) ELISA Kit人TH糖蛋白(THP)试剂盒
普氏粪杆菌结蛋白抗体Human PROSER1 (Proline and serine-rich protein 1) ELISA KIT人TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)试剂盒
副溶血性弧菌检测试剂盒(PCR-荧光探针法SN标准)组蛋白H4抗体25(S)-鲁斯可皂苷元-1-O-α-L-吡喃鼠李糖... Boc-Asp(OtBu)-OH
乙酰化组蛋白H4抗体25-脱水泽泻A;泽泻G(标准品) Boc-D-Pro-OH
三化组蛋白H3抗体26-脱氧升麻苷 Boc-Ser-OMe
二化组蛋白H3抗体28-O-顺芷酰匙羹藤新苷元 N-BOC-O-Benzyl-L-serine
二化组蛋白H3K4抗体28-去-β-香树脂 Boc-Thr-OH
二化组蛋白H3K9抗体28-去-β-香树脂(标准品) Boc-L-Trp(For)-OH
三化组蛋白H3抗体2’-乙酰毛蕊花糖苷(标准品) Boc-D-Tyr-OH
乙酰化组蛋白H3抗体2”-O-没食子酰金丝桃苷(标准品) Boc-Tyr-OMe
乙酰化组蛋白H3抗体3"-O-表没食子儿茶素没食子酯 Boc-O-(2-bromo-Cbz)-L-Tyrosine
颗粒酶K抗体RAMP-1/FITC 荧光素标记受体活性调制蛋白1抗体IgG
甘油磷酸二酯酶磷酸结构域5抗体RAP1A/FITC 荧光素标记抗Rap1抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。