PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 阪崎肠杆菌检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
货号:BH-P64174
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
葡萄座腔菌属磷酸化HER2受体抗体Human IVL(Involucrin) ELISA Kit人G蛋白偶合受体44(GPR44/CRTH2/DL1R)试剂盒
糙孢篮状菌磷酸化HER2受体抗体Human NSMAF (Protein FAN) ELISA KIT人GTP酶NRas(NRAS)试剂盒
绿色木霉=木素木霉磷酸化HER3受体抗体Human NCEH1 (Neutral cholesterol ester hydrolase 1) ELISA KIT人Gremlin-1蛋白(GREM1)试剂盒
坚强芽孢杆菌磷酸化HER4抗体Human PILRB(Paired immunoglobulin-like type 2 receptor beta) ELISA Kit人GDP解离抑制因子2(GdI2)试剂盒
扣囊复膜孢酵母磷酸化HER4抗体Human NPTXR(Neuronal pentraxin receptor) ELISA Kit人GAD/IA2自身抗体试剂盒
球形芽孢杆菌转录因子ERF抗体Human NCF1 (Neutrophil cytosol factor 1) ELISA KIT人G1/S特异性周期蛋白E1(CCNE1)试剂盒
地中海拟无枝酸菌磷酸化转录因子ERF抗体Human MAP2(Microtubule-associated protein 2) ELISA Kit人F-肌动蛋白(F-actin)试剂盒
热带假丝酵母真核肽链释放因子1抗体Human NPSR1 (Neuropeptide S receptor) ELISA KIT人FOS 样抗原2(FOSL2)试剂盒
出芽短梗霉真核肽链释放因子3a抗体Human NPFF (Pro-FMRFamide-related neuropeptide FF) ELISA KIT人FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt-3L)试剂盒
空肠弯曲杆菌表皮生长因子受体底物15抗体Human GAP43(Neuromodulin) ELISA Kit人FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)试剂盒
佛雷德里克斯堡假单胞菌内吞作用辅助蛋白EPN1抗体Human NETO1 (Neuropilin and tolloid-like protein 1) ELISA KIT人Fc受体样蛋白3(FCRL3)试剂盒
Aurantimonas coralicida内吞作用辅助蛋白EPN2抗体Human NLK (Serine/threonine-protein kinase NLK) ELISA KIT人FAM172A蛋白(FAM172A)试剂盒
疏水戈登氏菌内质网定位蛋白ERGI3抗体Human NSF (Vesicle-fusing ATPase) ELISA KIT人E选择素(E-Selectin/CD62E)试剂盒
荧光假单胞菌内质网氧化物蛋白Ero1-Lα抗体Human NRSN1 (Neurensin-1) ELISA KIT人E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)试剂盒
济州单胞菌内质网蛋白ERp19抗体Human NANP (N-acylneuraminate-9-phosphatase) ELISA KIT人ES1蛋白同系物,线粒体(C21orf33/HES1/KNPI)试剂盒
黑根霉内质网蛋白ERp72抗体Human MYNN (Myoneurin) ELISA KIT人Ephrin-B2(EFNB2)试剂盒
阪崎肠杆菌检测试剂盒(PCR-荧光探针法)组织蛋白酶D抗体Nodal同源物(NODAL)检测试剂盒NODAL ELISA Kit
组织蛋白酶H抗体NADH脱氢酶1(ND1)检测试剂盒ND1 ELISA Kit
磷化钙/钙调素依赖蛋白激酶2α抗体Misato同源物1(MSTO1)检测试剂盒MSTO1 ELISA Kit
磷化半胱氨蛋白酶9抗体Mdm2p53结合蛋白同源物(MDM2)检测试剂盒MDM2 ELISA Kit
磷化半胱氨蛋白酶9抗体M2-型丙激酶(PKM2)检测试剂盒PKM2 ELISA Kit
磷化β 连环素蛋白抗体L-型电压依赖性钙离子通道α1D亚(CACNα1D)检测试剂盒CACNα1D ELISA Kit
磷化β 连环素蛋白抗体L-型电压依赖钙离子通道α1S亚(CACNα1S)检测试剂盒CACNα1S ELISA Kit
磷化β 连环素蛋白抗体L-型电压依赖钙离子通道α1F亚(CACNα1F)检测试剂盒CACNα1F ELISA Kit
磷化β 连环素蛋白抗体L-型电压依赖钙离子通道α1C亚(CACNα1C)检测试剂盒CACNα1C ELISA Kit
绿色荧光蛋白抗体RelB /FITC 荧光素标记核转录因子NFKB-RelB蛋白抗体IgG
G蛋白通路抑制蛋白1抗体Regucalcin/SMP30/Rgn/FITC 荧光素标记衰老标记蛋白30抗体IgG