使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: MS2过程控制试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管
货号:BH-P64181
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
![](https://yt.yzimgs.com/ComFolder/200132334/image/202108/202108051515010801.jpg)
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
![](https://yt.yzimgs.com/ComFolder/200132334/image/202108/202108051515218291.png)
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
阿舒假囊酵母染色体区域稳定蛋白/核输出蛋白1抗体Human HBXIP(Hepatitis B virus X-interacting protein) ELISA Kit人A组链球菌多糖抗原(ASP Ag)试剂盒
酿酒酵母磷酸化转录因子ELK1抗体Human MST1R(Macrophage-stimulating protein receptor) ELISA Kit人A激酶PRKA锚定蛋白12(Akap12)试剂盒
猪链球菌ETS相关蛋白71抗体Human LOR (Loricrin) ELISA KIT人AT丰富结合域1A(ARID1A)试剂盒
枯草芽胞杆菌外胚层发育**蛋白1抗体Human LRTM1 (Leucine-rich repeat and transmembrane domain-containing protein 1) ELISA KIT人Apelin 试剂盒
节状镰孢ETV3L蛋白抗体Human LDLRAP1 (Low density lipoprotein receptor adapter protein 1) ELISA KIT人Apelin 36(AP36)试剂盒
直丝淡紫灰链霉菌酪氨酸蛋白激酶受体B6抗体Human LRRN4CL (LRRN4 C-terminal-like protein) ELISA KIT人apelin 13(AP13)试剂盒
慢生根瘤菌溶血磷脂酸受体蛋白1抗体Human LECT1 (Leukocyte cell-derived chemotaxin 1) ELISA KIT人apelin 12(AP12)试剂盒
樟疫霉溶血磷脂酸受体蛋白2抗体Human LZTR1 (Leucine-zipper-like transcriptional regulator 1) ELISA KIT人AP-5复合物β亚基(PP1030)试剂盒
产气荚膜梭菌 素D型溶血磷脂酸受体蛋白3抗体Human LCP2 (Lymphocyte cytosolic protein 2) ELISA KIT人alpha突触核蛋白(淀粉样前体非A4成分蛋白)低聚物(SNCA oligomer)试剂盒
产气弧菌内皮的分化蛋白6抗体Human LYL1 (Protein lyl-1) ELISA KIT人Alpha-D 酚/维生素E(Alpha-D TPL)试剂盒
醋化醋杆菌外生性骨疣样蛋白2抗体Human POMC(Pro-opiomelanocortin) ELISA Kit人alpha-1肾上腺素能受体(ADRA1)IgG抗体试剂盒
酿酒酵母磷酸化eIF4E结合蛋白抗体Human SEMG2(Semenogelin-2) ELISA Kit人AFG3样蛋白2(AFG3L2)试剂盒
鲁氏接合酵母磷酸化eIF4E结合蛋白抗体Human LMCD1 (LIM and cysteine-rich domains protein 1) ELISA KIT人Adropin(ENHO)试剂盒
冷温木拉克酵母内皮特异性分子1抗体Human LYRM1 (LYR motif-containing protein 1) ELISA KIT人ADP-核糖基化因子5(ARF5)试剂盒
枯草芽孢杆菌真核翻译起始因子3F抗体Human LMO1 (Rhombotin-1) ELISA KIT人ADP-核糖基化因子4(ARF4)试剂盒
蜡状芽孢杆菌真核翻译起始因子3H抗体Human KDM1A(Lysine-specific histone demethylase 1A) ELISA Kit人ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4(ADAMTS4)试剂盒
MS2过程控制试剂盒(PCR-荧光探针法)
G蛋白偶联受体75抗体RNF126/FITC 荧光素标记环指蛋白126抗体IgG
GATA结合蛋白4抗体RNF148/FITC 荧光素标记环指蛋白148抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。