PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 猪源性成分检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T /50T /0.2PCR管
货号:BH-P64183
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
金黄色葡萄球菌金黄亚种酪氨酸蛋白激酶受体A10抗体Human LCP1 (Plastin-2) ELISA KIT人5羟二十碳四烯酸(5-HETE)试剂盒
肠膜明串珠菌肠道病71型/手足口病病抗体Human LIG1 (DNA ligase 1) ELISA KIT人5核苷酸酶(5-NT)试剂盒
假单胞菌转录因子ELF1抗体Human LCP2 (Lymphocyte cytosolic protein 2) ELISA KIT人5'-AMP活化蛋白激酶α-2催化亚基(PRKAA2)试剂盒
大肠埃希氏菌酪氨酸蛋白激酶B3抗体Human SEMG2(Semenogelin-2) ELISA Kit人Ⅳ型前胶原氨基末端肽(PⅣNP)试剂盒
鸭疫里氏杆菌磷酸化酪氨酸蛋白激酶受体B1+B2抗体Human POMC(Pro-opiomelanocortin) ELISA Kit人Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)试剂盒
农球菌酪氨酸蛋白激酶受体B1+B2+B3+B4抗体Human LYRM1 (LYR motif-containing protein 1) ELISA KIT人4-羟基壬烯酸(HNE)试剂盒
溶杆菌空通气孔样蛋白2抗体Human KMO(Kynurenine 3-monooxygenase) ELISA Kit人40S核糖体蛋白S19(RPS19)试剂盒
微白黄链霉菌同源盒蛋白转录因子EN2抗体Human LMCD1 (LIM and cysteine-rich domains protein 1) ELISA KIT人Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)试剂盒
粪肠球菌磷酸化外信号调节激酶5抗体Human LRRK1 (Leucine-rich repeat serine/threonine-protein kinase 1) ELISA KIT人Ⅲ型前胶原氨基末端肽(PⅢNP)试剂盒
平菇CD39样蛋白1抗体Human LCT (Lactase-phlorizin hydrolase) ELISA KIT人Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)试剂盒
链霉菌真核翻译起始因子5抗体Human LRGUK (Leucine-rich repeat and guanylate kinase domain-containing protein) ELISA KIT人Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)试剂盒
大丽轮枝霉早期B因子2抗体Human LACE1 (Lactation elevated protein 1) ELISA KIT人Ⅲ型前胶原(HPCⅢ)试剂盒
鲁氏接合酵母ELAVL2蛋白抗体Human TFCP2(Alpha-globin transcription factor CP2) ELISA Kit人Ⅲ型胶原蛋白(COL Ⅲ)试剂盒
枯草芽孢杆菌ELAVL2+ELAVL4蛋白抗体Human IPP (Actin-binding protein IPP) ELISA KIT人Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)试剂盒
白鲍鱼菇同源盒蛋白转录因子EN1抗体Human LBX1 (Transcription factor LBX1) ELISA KIT人3氧代5α类固4脱氢酶2(SRD5A2)试剂盒
米曲霉转录因子ER81蛋白抗体Human PTN(Pleiotrophin) ELISA Kit人3型1-磷酸鞘氨受体(S1P3)试剂盒
猪源性成分检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
庆大霉素抗体ROS/FITC 荧光素标记活性氧簇ROS抗体IgG
半乳糖凝集素9抗体RPLP0/FITC 荧光素标记酸性核糖体磷蛋白大亚P0抗体IgG