使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 鹅源性检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.2PCR管
货号:BH-P64188
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加���被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
假单胞菌EHM2蛋白抗体Human HIVEP2 (Transcription factor HIVEP2) ELISA KIT犬胰岛素原(PI)试剂盒
雅致小克银汉霉磷酸化真核翻译起始因子4E抗体Human HCK (Tyrosine-protein kinase HCK) ELISA KIT犬胰岛素样因子3(INSL3)试剂盒
假单胞菌属翻译延伸因子EF-1a抗体Human HEPACAM2 (HEPACAM family member 2) ELISA KIT犬胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)试剂盒
壳二胞属磷酸化雌受体α抗体Human CIRBP(Cold-inducible RNA-binding protein) ELISA Kit犬胰岛素样生长因子II(IGF2)试剂盒
球孢白僵菌磷酸化表皮生长因子受体抗体Human HAVCR2 (Hepatitis A virus cellular receptor 2) ELISA KIT犬胰岛素样生长因子1(IGF1)试剂盒
苍白杆菌磷酸化丝裂原活化蛋白激酶1抗体Human HGSNAT (Heparan-alpha-glucosaminide N-acetyltransferase) ELISA KIT犬胰岛素受体β(ISR-β)试剂盒
异常汉逊酵母磷酸化丝裂原活化蛋白激酶1/2抗体Human HYPK (Huntingtin-interacting protein K) ELISA KIT犬胰岛素(INS)试剂盒
猴头酪氨酸蛋白激酶受体B4抗体Human HIVEP2 (Transcription factor HIVEP2) ELISA KIT犬胰蛋白酶原激活肽(TAP)试剂盒
亮白曲霉酪氨酸蛋白激酶A5受体抗体Human HEMK1 (HemK methyltransferase family member 1) ELISA KIT犬胰蛋白酶原-1 试剂盒
孢丝盖伞上皮钠离子通道蛋白γ/γENaC抗体Human HCK (Tyrosine-protein kinase HCK) ELISA KIT犬胰蛋白酶(trypsin)试剂盒
橄榄色链霉菌癌基因ETS2抗体Human CIRBP(Cold-inducible RNA-binding protein) ELISA Kit犬一氧化氮(NO)试剂盒
侧耳内皮素3抗体Human HYPK (Huntingtin-interacting protein K) ELISA KIT犬叶酸(FA)试剂盒
华丽侧耳(佛罗里达侧耳)磷酸化外信号调节激酶5抗体Human HEPACAM2 (HEPACAM family member 2) ELISA KIT犬血纤蛋白原降解产物(FDP)试剂盒
滑菇磷酸化外信号调节激酶5抗体Human HGSNAT (Heparan-alpha-glucosaminide N-acetyltransferase) ELISA KIT犬血纤蛋白原(Fbg)试剂盒
野梧桐欧文氏菌外信号调节激酶4抗体Human HAVCR2 (Hepatitis A virus cellular receptor 2) ELISA KIT犬血栓素B2(TXB2)试剂盒
松口蘑肠出血性大肠杆菌埃希氏菌O157:H7抗体Human HNRNPM (Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein M) ELISA KIT犬血栓前体蛋白(TpP)试剂盒
鹅源性检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
生长分化因子8/肌肉抑制素抗体S100-A8/MRP8/CFAG/FITC 荧光素标记钙结合蛋白S100A8抗体IgG
磷酸化糖原合酶激酶3α/β抗体S100-A9/MRP14/CFAG/FITC 荧光素标记钙结合蛋白S100A9抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。