使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 狐狸源性检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.2PCR管
货号:BH-P64190
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
酿酒酵母烯酰辅酶A水合酶1抗体Human SARDH(Sarcosine dehydrogenase, mitochondrial) ELISA Kit犬间粘附分子1(ICAM-1/CD54)试剂盒
大肠埃希菌烯酰辅酶A水合酶含结构域蛋白2抗体Human HHAT (Protein-cysteine N-palmitoyltransferase HHAT) ELISA KIT犬维生素K1(VK1)试剂盒
德尔布有孢酵母肿瘤坏死因子受体超家族成员EDAR抗体Human GSKIP (GSK3-beta interaction protein) ELISA KIT犬维生素E(VE)试剂盒
乳杆菌属自身抗原EDC4抗体Human GAPVD1 (GTPase-activating protein and VPS9 domain-containing protein 1) ELISA KIT犬维生素A(VA)试剂盒
盘多毛孢菌E3泛素蛋白连接酶EDD抗体Human GNMT(Glycine N-methyltransferase) ELISA Kit犬透明质酸酶4(HAase 4)试剂盒
滑假丝酵母胚胎外胚层发育蛋白EED抗体Human GVINP1 (Interferon-induced very large GTPase 1) ELISA KIT犬透明质酸酶3(HAase 3)试剂盒
松木层孔菌转录接头蛋白EP300抗体Human GARNL3 (GTPase-activating Rap/Ran-GAP domain-like protein 3) ELISA KIT犬透明质酸酶2(HAase 2)试剂盒
变化赖氨酸芽孢杆菌内皮脂肪酶抗体Human GDA (Guanine deaminase) ELISA KIT犬透明质酸酶1(HAase 1)试剂盒
枯草芽孢杆菌MYC启动子结合蛋白1抗体Human GP2 (Pancreatic secretory granule membrane major glycoprotein GP2) ELISA KIT犬透明质酸(HA)试剂盒
硫磺绚孔菌内质网蛋白29抗体Human GNL3 (Guanine nucleotide-binding protein-like 3) ELISA KIT犬特殊基团成分(维生素D结合蛋白)(GC)试剂盒
酿酒酵母烯脂酰辅酶A水解酶抗体Human GPM6B (Neuronal membrane glycoprotein M6-b) ELISA KIT犬髓过氧化物酶(MPO)试剂盒
台湾几丁质单胞菌磷酸化4E结合蛋白1抗体Human COLGALT2 (Procollagen galactosyltransferase 2) ELISA KIT犬松弛肽/松弛素(RLN)试剂盒
贝莱斯芽胞杆菌三羟酰辅酶A脱氢酶抗体Human GPIHBP1 (Glycosylphosphatidylinositol-anchored high density lipoprotein-binding protein 1) ELISA KIT犬水通道蛋白5(AQP5)试剂盒
*美味牛肝菌限制过度增殖相关蛋白EML4抗体Human GNL3L (Guanine nucleotide-binding protein-like 3-like protein) ELISA KIT犬双氢睾酮(DHT)试剂盒
发酵性酵母ETS1相关蛋白2抗体Human GMPR2 (GMP reductase 2) ELISA KIT犬视黄结合蛋白4(RBP-4)试剂盒
亚美尼亚固氮菌EFHA1蛋白抗体Human PIGR(Polymeric Immunoglobulin Receptor/Membrane Secretory Component) ELISA Kit犬生长(GH)试剂盒
狐狸源性检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
人类状瘤病33 E6蛋白抗体Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) /FITC 荧光素标记磷酸化S6核糖体蛋白抗体IgG
Beta氨己糖苷酶beta亚蛋白A链抗体S100B/FITC 荧光素标记S100B蛋白抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。