使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 驴源性成分检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.2PCR管
货号:BH-P64194
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
北成对杆菌转录因子ETV7抗体Human FGGY (FGGY carbohydrate kinase domain-containing protein) ELISA KIT犬基质金属蛋白酶13(MMP-13)试剂盒
小立碗藓类芽孢杆菌ELAVL1抗体Human FBLL1 (rRNA/tRNA 2′-O-methyltransferase fibrillarin-like protein 1) ELISA KIT犬基质金属蛋白酶1(MMP-1)试剂盒
枯草芽孢杆菌胚胎干相关转录因子1抗体Human FIZ1 (Flt3-interacting zinc finger protein 1) ELISA KIT犬肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)试剂盒
间座壳表皮生长因子受体III型突变体抗体Human FAP (Prolyl endopeptidase FAP) ELISA KIT犬肌红蛋白(MYO/MB)试剂盒
墨西哥剑菌红膜蛋白条带EPB41L5抗体Human FLYWCH2 (FLYWCH family member 2) ELISA KIT犬肌酐(Cr)试剂盒
禾粘座孢霉(或禾漆斑菌)早期发育调控蛋白1抗体Human FLYWCH1 (FLYWCH-type zinc finger-containing protein 1) ELISA KIT犬黄体**素(LH)试剂盒
绒囊耙齿菌转录因子ETV6抗体Human MCP/CD46(Membrane Cofactor Protein) ELISA Kit犬环磷酸腺苷(cAMP)试剂盒
胶冻样芽胞杆菌跨膜通道蛋白8抗体Human PSEN2(Presenilin-2) ELISA Kit犬环磷酸鸟苷(cGMP)试剂盒
杂色曲霉尤文氏肉瘤相关EWS蛋白抗体Human FKRP (Fukutin-related protein) ELISA KIT犬环加氧酶2(COX-2)试剂盒
桔橙小单孢菌核酸外切酶1抗体Human FUS(RNA-binding protein FUS) ELISA Kit犬红**素(EPO)试剂盒
枯草芽孢杆菌多发性肌炎/硬皮病自身抗原2抗体Human FUNDC1 (FUN14 domain-containing protein 1) ELISA KIT犬胱天蛋白酶12(Casp-12)试剂盒
棕黑腐质霉核糖体RNA合成蛋白40抗体Human FNBP1L (Formin-binding protein 1-like) ELISA KIT犬骨形成蛋白-1(BMP-1)试剂盒
坟墓节杆菌核糖体RNA合成蛋白42抗体Human FNBP4 (Formin-binding protein 4) ELISA KIT犬骨桥素(OPN)试剂盒
鸡白痢沙门氏菌多发性外生骨疣样蛋白3抗体Human FGF22 (Fibroblast growth factor 22) ELISA KIT犬骨碱性磷酸酶(BALP)试剂盒
布雷链格孢转录因子EYA1抗体Human FHOD1 (FH1/FH2 domain-containing protein 1) ELISA KIT犬骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)试剂盒
pBIFC-VC155磷酸化埃兹蛋白抗体Human FYB (FYN-binding protein) ELISA KIT犬骨成型蛋白7(BMP7)试剂盒
驴源性成分检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
血红素氧合酶 1/热休克蛋白32抗体SCF/FITC 荧光素标记干生长因子抗体IgG
磷酸化HER3受体抗体SCG3/SgIII /FITC 荧光素标记分泌粒蛋白Ⅲ抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。