使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 水貂源性成分检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.2PCR管
货号:BH-P64198
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
弗雷德里克斯堡假单胞菌上皮有丝分裂蛋白抗体Human EPS8L1 (Epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 1) ELISA KIT犬S100B蛋白(S100B)试剂盒
不吸水链霉菌Emerin蛋白抗体Human ELSPBP1 (Epididymal sperm-binding protein 1) ELISA KIT犬P选择素(SELP)试剂盒
寄生孢外信号调节激酶5抗体Human ERN2 (Serine/threonine-protein kinase/endoribonuclease IRE2) ELISA KIT犬P物质受体(TACR1)试剂盒
巨大曲霉磷酸酶/磷酸二酯酶家族成员5抗体Human EPS8L3 (Epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 3) ELISA KIT犬N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒
禾粘座孢霉(或禾漆斑菌)早期生长反应蛋白2抗体Human EPC1 (Enhancer of polycomb homolog 1) ELISA KIT犬N端前心钠肽(NT-ProANP)试剂盒
盐水盐土生古菌磷酸化雌受体β抗体Human ERAS (GTPase ERas) ELISA KIT犬N端前脑钠素(NT-proBNP)试剂盒
猪丹丝菌乙激酶β抗体Human ECHDC1 (Ethylmalonyl-CoA decarboxylase) ELISA KIT犬KI-67抗原(MKI67)试剂盒
栗疫菌微管相关末端结合蛋白2抗体Human ERRFI1(ERBB receptor feedback inhibitor 1) ELISA Kit犬I 型胶原蛋白试剂盒
波恩佩岛苍黄色杆菌减数分裂内切酶EME1抗体Human EVPL (Envoplakin) ELISA KIT犬E选择素(SELE)试剂盒
木霉延伸突触蛋白2抗体Human ENOSF1 (Mitochondrial enolase superfamily member 1) ELISA KIT犬C肽(C-Peptide)试剂盒
胶孢延伸突触蛋白1抗体Human ERAS (GTPase ERas) ELISA KIT犬C反应蛋白(CRP)试剂盒
红根须腹菌红膜蛋白4.2抗体Human TYROBP(TYRO protein tyrosine kinase-binding protein) ELISA Kit犬CD8分子(CD8)试剂盒
南类芽孢杆菌转录因子ELYS蛋白抗体Human ENOSF1 (Mitochondrial enolase superfamily member 1) ELISA KIT犬CD6分子(CD6)试剂盒
芽孢杆菌内皮粘蛋白EMCN抗体Human ERRFI1(ERBB receptor feedback inhibitor 1) ELISA Kit犬CD4分子(CD4)试剂盒
米串珠镰孢环磷酸腺苷调节鸟嘌呤核苷酸交换因子1抗体Human DSCAM (Down syndrome cell adhesion molecule homolog) ELISA KIT犬CD31分子(CD31)试剂盒
灰平链霉菌磷酸化转录因子E2F1抗体Human EDARADD (Ectodysplasin-A receptor-associated adapter protein) ELISA KIT犬CC趋化因子受体2(CCR2)试剂盒
水貂源性成分检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
磷酸化组蛋白去乙酰化酶3抗体Secretin receptor/FITC 荧光素标记分泌素受体抗体IgG
组蛋白H2B抗体SEL1L/FITC 荧光素标记SEL1L抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。