使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 猫源性成分检测试剂盒(PCR-荧光探针法
规格: 48T 0.2PCR管
货号:BH-P64199
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
需钠弧菌上皮特异性转录因子1抗体Human DSCAML1 (Down syndrome cell adhesion molecule-like protein 1 homolog) ELISA KIT犬B瘤因子2(Bcl-2)试剂盒
油菜菌核病菌内皮素2抗体Human EDA2R (Tumor necrosis factor receptor superfamily member 27) ELISA KIT犬B-趋化因子1(BLC-1/CXCL13)试剂盒
枯草芽孢杆菌内皮受体蛋白酪氨酸激酶B3抗体Human DPP9(Dipeptidyl peptidase 9) ELISA Kit犬Bcl-2相关X蛋白(BAX)试剂盒
围小丛壳菌软骨外胚层发育**相关蛋白抗体Human DYDC2 (DPY30 domain-containing protein 2) ELISA KIT犬5羟色(5-HT)试剂盒
平菇—法无孢髓鞘蛋白P0样蛋白2抗体Human EPS8L3 (Epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 3) ELISA KIT犬Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)试剂盒
枯草芽孢杆菌雌受体α抗体Human EPC1 (Enhancer of polycomb homolog 1) ELISA KIT犬Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)试剂盒
香菇内质网核信号转导蛋白2抗体Human ERAS (GTPase ERas) ELISA KIT犬25羟基维生素D3(25 HVD3)试剂盒
美澳型核果褐腐病菌锌指蛋白521抗体Human ENOSF1 (Mitochondrial enolase superfamily member 1) ELISA KIT犬2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)试剂盒
柠檬色小单孢菌大肠杆菌埃希杆菌O6抗体(肠致病性大肠杆菌O6)Human ERRFI1(ERBB receptor feedback inhibitor 1) ELISA Kit犬17羟孕酮(17-OHP)试剂盒
Sphingobacterium composti植物延展素-βHuman TYROBP(TYRO protein tyrosine kinase-binding protein) ELISA Kit牛ELISA试剂盒
黄杆菌内皮素-1抗体Human ECHDC1 (Ethylmalonyl-CoA decarboxylase) ELISA KIT牛组(HIS)试剂盒
炭疽芽孢杆菌丝裂原活化蛋白激酶4抗体Human EVPL (Envoplakin) ELISA KIT牛总蛋白S(TPS)试剂盒
盘孢属埃兹蛋白抗体Human EPT1 (Ethanolaminephosphotransferase 1) ELISA KIT牛转录因子P65(RELA)试剂盒
孢小克银汉霉原变种转录因子ELK1抗体Human DUSP3 (Dual specificity protein phosphatase 3)ELISA KIT牛转化生长因子β2(TGFβ2)试剂盒
枯草芽孢杆菌内皮素-1单克隆抗体Human EOMES (Eomesodermin homolog) ELISA KIT牛转化生长因子β1(TGF-β1)试剂盒
泰国盐球菌肠道病71型抗体Human ENAM (Enamelin) ELISA KIT牛主要组织相容性复合体(MHC/BoLA)试剂盒
猫源性成分检测试剂盒(PCR-荧光探针法
短链L-3羟烷辅酶A脱氢酶抗体Selenoprotein W/FITC 荧光素标记硒蛋白W抗体IgG
组蛋白去乙酰化酶9抗体Sema3A/FITC 荧光素标记臂板蛋白3A抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。