PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 大豆源性成分检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
规格: 48T 0.2PCR管
货号:BH-P64206
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性��定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
棘孢小单孢菌外基质蛋白FRAS1抗体Human CTDSPL (CTD small phosphatase-like protein) ELISA KIT牛缪勒管抑制物质/抗缪勒管(AMH)试剂盒
杨生盘二孢富马酸水合酶抗体Human CTPS1 (CTP synthase 1) ELISA KIT牛球蛋白G-2(IgG-2)试剂盒
地衣芽孢杆菌成纤维生长因子21抗体Human SLC14A1(Urea transporter 1) ELISA Kit牛球蛋白G-1(IgG-1)试剂盒
类高加索酸奶乳杆菌核仁纤维蛋白抗体Human CRIM1 (Cysteine-rich motor neuron 1 protein) ELISA KIT牛球蛋白G(IgG)试剂盒
糙皮侧耳铁蛋白轻链抗体Human CLEC12A (C-type lectin domain family 12 member A) ELISA KIT牛球蛋白E(IgE)试剂盒
慢生海杆状菌*肝核因子3抗体Human CYHR1 (Cysteine and histidine-rich protein 1) ELISA KIT牛球蛋白A(IgA)试剂盒
卷枝毛霉詹森变型果糖1,6-二磷酸酯酶抗体Human CUBN(Cubilin) ELISA Kit牛卵泡抑素(FST)试剂盒
黄赭色链霉菌6磷酸果糖激酶抗体Human CRIP1 (Cysteine-rich protein 1) ELISA KIT牛磷酸烯式酮酸羧激酶(PCK)试剂盒
阪崎肠杆菌肌肉果糖二磷酸酶抗体Human CUEDC1 (CUE domain-containing protein 1) ELISA KIT牛磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)试剂盒
罗尔斯通氏菌纤维蛋白原γ链抗体Human CRISPLD1 (Cysteine-rich secretory protein LCCL domain-containing 1) ELISA KIT牛磷酸果糖激酶(PFK)试剂盒
酿酒酵母纤维蛋白肽B抗体(血纤肽B)Human CPXCR1 (CPX chromosomal region candidate gene 1 protein) ELISA KIT牛磷酸甘油酸酯激酶2(PGK2)试剂盒
巴斯德毕赤酵母原癌基因c FGR抗体Human CDRT4 (CMT1A duplicated region transcript 4 protein homolog) ELISA KIT牛口蹄疫(FMDV)抗体(IgM)试剂盒
粪产碱菌肢体畸形相关蛋白FHOD1抗体Human CFDP1 (Craniofacial development protein 1) ELISA KIT牛可溶性CD86(B7-2/sCD86)试剂盒
汉逊德巴利酵母磷酸化肢体畸形相关蛋白FHOD1抗体Human CRAMP1 (Protein cramped-like) ELISA KIT牛可溶性CD8(sCD8)试剂盒
酿酒酵母纤连蛋白2抗体Human CEP85 (Centrosomal protein of 85 kDa) ELISA KIT牛试剂盒
无色杆菌纤连蛋白7抗体Human FOXC2(Forkhead box protein C2) ELISA Kit牛金属硫蛋白(MT)试剂盒
大豆源性成分检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
肝核因子1α抗体Shadow/SPRN/FITC 荧光素标记新朊蛋白/朊蛋白相关蛋白/沙杜(Shadoo)蛋白抗体IgG
缺氧诱导因子1β /HIF-1β抗体Shank1/FITC 荧光素标记shank-1抗体IgG