使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 禽腺病毒(FADV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64217
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
酿酒酵母单跨膜蛋白FOXRED1抗体Human AAGAB (Alpha- and gamma-adaptin-binding protein p34) ELISA KIT绵羊弹性蛋白酶2,中性粒(ELA2)试剂盒
浅紫灰链霉菌浅紫灰亚种FOXRED2蛋白抗体Human AGPS (Alkyldihydroxyacetonephosphate synthase, peroxisomal) ELISA KIT绵羊催产素(OT)试剂盒
酿酒酵母岩藻糖1磷酸鸟苷酰转移酶抗体Human ADRB2 (Beta-2 adrenergic receptor) ELISA KIT绵羊雌二(E2)试剂盒
雷斯青霉外基质蛋白FREM1抗体Human ALMS1 (Alstrom syndrome protein 1) ELISA KIT绵羊成纤维生长因子23(FGF23)试剂盒
蜡样芽胞杆菌 (蜡状芽胞杆菌)原癌基因FRAT1抗体Human ADRA1D (Alpha-1D adrenergic receptor) ELISA KIT绵羊补体片段3b受体(C3bR)试剂盒
黑曲霉叉头蛋白D1抗体Human AMER1 (APC membrane recruitment protein 1) ELISA KIT绵羊补体片段3a(C3a)试剂盒
长柔毛栓孔菌凝血因子11重链抗体Human AMBN (Ameloblastin) ELISA KIT绵羊白介素8(IL-8/CXCL8)试剂盒
谢瓦曲霉凝血因子12轻链抗体Human APCDD1 (Protein APCDD1) ELISA KIT绵羊白介素6(IL-6)试剂盒
表皮葡萄球菌FLAG Tag标签抗体(C端)Human ADRB1 (Beta-1 adrenergic receptor) ELISA KIT绵羊白介素4(IL-4)试剂盒
苛求芽胞杆菌补体因子I重链抗体Human SPAG9(C-Jun-amino-terminal kinase-interacting protein 4) ELISA Kit绵羊白介素2受体(IL-2R)试剂盒
烟管菌凝血因子8/第八凝血因子/第八因子相关抗原轻链抗体Human ADAR (Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase) ELISA KIT绵羊白介素2(IL-2)试剂盒
节杆菌磷酸化叉头蛋白4抗体Human STC2(Stanniocalcin-2) ELISA Kit绵羊白介素1β(IL-1β)试剂盒
青霉磷酸化叉头蛋白4抗体Human ADCY9 (Adenylate cyclase type 9) ELISA KIT绵羊白介素1α(IL-1α)试剂盒
普利茅斯沙雷氏菌甲酸基肽受体1抗体Human AHCYL1 (Adenosylhomocysteinase 2) ELISA KIT绵羊白介素13(IL-13)试剂盒
甲型副伤寒沙门氏菌磷酸化粘着斑激酶抗体Human ADSL(Adenylosuccinate lyase) ELISA Kit绵羊白介素12(IL-12)试剂盒
窄食单胞菌FUT5抗体Human AHCYL2 (Adenosylhomocysteinase 3) ELISA KIT绵羊白介素10(IL-10)试剂盒
禽腺病毒(FADV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
热休克蛋白-60抗体Phospho-SHIP2 (Tyr986/987) /FITC 荧光素标记磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶2抗体IgG
热休克蛋白-70抗体Phospho-RIP2 (Ser176) /FITC 荧光素标记磷酸化受体结合丝氨酸苏氨酸激酶2抗体IgG
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。