使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 猪细小病毒(PPV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64252
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
根瘤菌谷氨酸受体红藻氨酸离子5抗体Human IDH1(IsocitRate dehydrogenase [NADP] cytoplasmic) ELISA Kit大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)试剂盒
麦根腐平脐孺孢棕榈酰转移酶GODZ抗体Human UBA2 ELISA Kit大鼠血小板活化因子(PAF)试剂盒
大丽花轮枝孢G蛋白信号调节蛋白1抗体Human UBA5 ELISA Kit大鼠血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)试剂盒
布鲁氏菌病(+)阳性血清G氨基丁酸受体β2+3/GABAA Rβ2+GABAA Rβ2抗体Human UBA6 ELISA Kit大鼠血纤蛋白原降解产物(FDP)试剂盒
孟氏假单胞菌G蛋白α抗体Human BAI3(Brain-specific angiogenesis inhibitor 3) ELISA Kit大鼠血纤蛋白原(Fbg)试剂盒
香菇G蛋白β样蛋白抗体Human TXNDC17 ELISA Kit大鼠血栓素合成酶(TXAS)试剂盒
莫氏克罗诺杆菌通用转录因子GTF2B抗体Human TULP1 ELISA Kit大鼠血栓素B2(TXB2)试剂盒
醋化醋杆菌磷酸化gp130抗体Human TUFT1 ELISA Kit大鼠血栓素A2(TXA2)试剂盒
戴尔根霉糖脂转移蛋白结构域2抗体Human UBA5 ELISA Kit大鼠血栓前体蛋白(TpP)试剂盒
红霉素链霉菌高尔基体膜相关蛋白6样蛋白4抗体Human BAI3(Brain-specific angiogenesis inhibitor 3) ELISA Kit大鼠血栓调节蛋白(TM)试剂盒
酿酒酵母胞浆区相关蛋白GIPC2抗体Human UBA6 ELISA Kit大鼠血清素受体2A/5-羟色受体2A(5-HT-2A)试剂盒
土曲霉糖基转移酶8结构域1抗体Human UBAC2 ELISA Kit大鼠血清素(5-羟色)-N-乙酰基转移酶(AANAT)试剂盒
短杆状马赛菌促代谢型谷氨酸受体2抗体Human UBASH3A ELISA Kit大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)试剂盒
香菇G蛋白修补结构域蛋白5抗体Human TXNDC5(Thioredoxin domain-containing protein 5) ELISA Kit大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)试剂盒
巴氏醋杆菌β1-6 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶6抗体Human UBAP1 ELISA Kit大鼠血红素氧合酶2(HO-2)试剂盒
明胶样链霉菌牛磺酸/β-氨基乙磺酸抗体Human TXNDC4 ELISA Kit大鼠血红素氧合酶1(HO-1)试剂盒
猪细小病毒(PPV)检测试剂盒(荧光-PCR法)糖尿病相关肽/胰岛淀粉样肽抗体前列腺素E2合成酶(PGES)检测试剂盒PGES ELISA Kit
血管紧张素Ⅱ抗体前列腺素E2(PGE-2)检测试剂盒PGE-2 ELISA Kit
血管紧张素Ⅱ受体1抗体前列腺素E2(PGE2)检测试剂盒PGE2 ELISA Kit
血管**素-1抗体前列腺素E1(PGE1)检测试剂盒PGE1 ELISA Kit
膜粘连蛋白5抗体前列腺素D2(PGD2)检测试剂盒PGD2 ELISA Kit
重组膜粘连蛋白5抗体前列环素(PGI2)检测试剂盒PGI2 ELISA Kit
衔接蛋白α-Adaptin抗体前白蛋白(PA)检测试剂盒PA ELISA Kit
凋亡蛋白活性因子-1抗体(C端)葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)检测试剂盒GIP ELISA Kit
凋亡蛋白活性因子-1抗体(N端)葡萄糖调节蛋白78(GRP78)检测试剂盒GRP78 ELISA Kit
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。