产品参数:
产品名称: 副猪嗜血杆菌(HPS)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64257
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
相思根瘤菌生长因子受体结合蛋白14抗体Human TSPAN11 ELISA Kit大鼠色素P4502E1(CYP2E1)试剂盒
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葡萄座腔菌甘酸-N-酰基转移酶样2抗体Human TSPAN2 ELISA Kit大鼠色素P450(CYP450)试剂盒
灵芝磷脂酰基蛋白聚糖2抗体Human SLC26A4(Pendrin) ELISA Kit大鼠色素P450 3A4(CYP3A4)试剂盒
根瘤菌氧化还原酶GlyR1/核蛋白60抗体Human TSPAN3 ELISA Kit大鼠色素P450 1A1(CYP1A1)试剂盒
戊糖乳杆菌神经鞘脂激活蛋白3抗体Human PPARGC1A(Peroxisome prolifeRator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha) ELISA Kit大鼠色素C氧化酶(COX)试剂盒
假单孢菌甘露糖脱水酶GMDS抗体Human TRPV5 ELISA Kit大鼠色素C(Cyt-C)试剂盒
枯草芽孢杆菌糖皮质调节元件结合蛋白1抗体Human TRPV4 ELISA Kit大鼠色素b5 试剂盒
耐久肠球菌糖皮质调节元件结合蛋白2抗体Human TSGA13 ELISA Kit大鼠膜钙转运ATP酶1(ATP2B1)试剂盒
古巴栓孔菌胶浆成熟因子γ/GMF-γ抗体Human TRPS1 ELISA Kit大鼠角蛋白18-M65(CK 18-M65)试剂盒
粉紫香蘑谷氨酰转移酶GMPS抗体Human TRPT1 ELISA Kit大鼠角蛋白18-M30(CK 18-M30)试剂盒
平滑正青霉GDP甘露糖焦磷酸化酶B抗体Human TSHZ3 ELISA Kit大鼠间粘附分子3(ICAM-3)试剂盒
新疆盐地杆菌G蛋白偶联胆汁酸受体1Human TRPV4 ELISA Kit大鼠间粘附分子2(ICAM-2)试剂盒
酿酒酵母葡萄糖6-磷酸脱氨酶1抗体Human TRPV5 ELISA Kit大鼠间粘附分子1(ICAM-1)试剂盒
硫磺菌葡萄糖6-磷酸脱氨酶2抗体Human TRUB2 ELISA Kit大鼠分裂周期基因(CDC)试剂盒
传染性****病葡萄糖6-N-乙酰基转移酶1抗体Human TRPV6 ELISA Kit大鼠性T相关抗原4(CTLA-4/CD152)试剂盒
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环指蛋白27抗体姜(标准品) Famoxadone solution
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G蛋白偶联受体激酶6抗体降香(标准品) Fomesafen
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生长停滞特异性蛋白6抗体焦地黄苯乙甙B1 Fipronil
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