使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 戊型肝炎病毒(HEV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64275
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温��,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
啤酒神金黄杆菌葡萄糖合成酶2抗体Human THAP2 ELISA Kit大鼠磷蛋白关联鞘糖脂微区1(PAG1)试剂盒
盾壳霉谷草转氨酶2抗体Human THG1L ELISA Kit大鼠趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)试剂盒
美澳型核果褐腐病菌葡萄糖-6磷酸脱氢酶抗体Human THEM4 ELISA Kit大鼠功能相关抗原3(LFA-3/CD58)试剂盒
黑曲霉葡萄糖转运蛋白5抗体Human THNSL2 ELISA Kit大鼠亮氨酰氨基肽酶(LAP)试剂盒
白僵菌葡萄糖合成酶1抗体Human THOC1 ELISA Kit大鼠粒巨噬集落激因子(GM-CSF)试剂盒
果生链核盘菌G蛋白修补结构域蛋白8抗体Human TGIF2LX ELISA Kit大鼠粒集落激因子(G-CSF)试剂盒
木贼镰孢甘油激酶3抗体Human THOC2 ELISA Kit大鼠类固5α还原酶1(SRD5A1)试剂盒
唾液乳杆菌高尔基体磷蛋白3样蛋白抗体Human TGM4 ELISA Kit大鼠类风湿因子(RF)试剂盒
泡囊短波单胞菌磷酸化谷氨酸受体1抗体Human TFDP2 ELISA Kit大鼠酪氨酸羟化酶(TH)试剂盒
康氏木霉G蛋白修补结构域蛋白1抗体Human TFDP1 ELISA Kit大鼠酪氨酸蛋白激酶JAK3(Jak3)试剂盒
pDC316磷酸化G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白1抗体Human SNX9(Sorting nexin-9) ELISA Kit大鼠克拉拉蛋白(CC16)试剂盒
云芝磷酸化G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白1Human TFE3 ELISA Kit大鼠可溶性肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(sTWEAK)试剂盒
灰树花孔菌葡萄糖激酶调节蛋白抗体Human TFEB ELISA Kit大鼠可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)试剂盒
土壤薄层菌GTP结合蛋白10抗体Human TFEC ELISA Kit大鼠可溶性血小板内皮粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)试剂盒
总状毛霉磷酸化Ras GTP酶活化蛋白结合蛋白1抗体Human TFIP11 ELISA Kit大鼠可溶性血纤蛋白单体复合物(SFMC)试剂盒
Cerrena unicolorRas GTP酶活化蛋白结合蛋白1抗体Human TFPT ELISA Kit大鼠可溶性血管内皮蛋白C受体(sEPCR)试剂盒
戊型肝炎病毒(HEV)检测试剂盒(荧光-PCR法)突触结合蛋白5抗体牛蒡子苷 ARCTIIN(P)Human, Mouse, Rat
磷化D酪氨激酶衰减蛋白1抗体熊果苷 ARBUTIN(P)Human, Mouse
可溶性附着蛋白α-SNAP抗体熊果苷 ARBUTIN(P)Human, Mouse, Rat
信号转导和转录激活因子4抗体熊果苷 ARBUTIN(P)Human
线粒体铁转运蛋白2抗体熊果苷 ARBUTIN(P)Human, Mouse
肿瘤抑制蛋白18抗体熊果苷 ARBUTIN(RG)Human, Mouse, Rat
锌指转录蛋白Sall1抗体1-二十烷 ARACHIDYL ALCOHOL(EICOSANOL)(SG)Human
锌指转录蛋白Sall4抗体1-二十烷 ARACHIDYL ALCOHOL(EICOSANOL)(SG)Human
转录因子SOX17抗体1-二十烷 ARACHIDYL ALCOHOL(EICOSANOL)(SG)Human
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。