使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 牛副结核分歧杆菌(MPB)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64289
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片��也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
链霉菌人类疱疹病8抗体Human SUDS3 ELISA Kit大鼠睾酮(T)试剂盒
灰肉链霉菌人类疱疹病8抗体Human REG3α(RegeneRating Islet Derived Protein 3 Alpha) ELISA Kit大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)试剂盒
废盐田枝芽孢杆菌雌下调基因1蛋白抗体Human SUGT1 ELISA Kit大鼠高敏状腺原氨酸(u-T3)试剂盒
红平菇(农)转录因子HEY2蛋白抗体Human SULT1A3 ELISA Kit大鼠高敏甲状腺素(u-T4)试剂盒
肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种肺癌相关蛋白Y抗体Human SULT1A4 ELISA Kit大鼠高密度脂蛋白胆固(HDL-C)试剂盒
烟薰链霉菌心脏和神经嵴衍生蛋白1抗体Human SULT1B1 ELISA Kit大鼠高密度脂蛋白3(HDL3)试剂盒
葡萄酒有孢汉逊酵母己糖激酶2抗体Human STXBP5 ELISA Kit大鼠高密度脂蛋白2(HDL2)试剂盒
斑玉蕈热休克蛋白90α/HSP90 α抗体Human IFI6(Interferon alpha-inducible protein 6) ELISA Kit大鼠高密度脂蛋白(HDL)试剂盒
溜曲霉血红蛋白β抗体Human STK17A ELISA Kit大鼠高灵敏度促甲状腺(U-TSH)试剂盒
厚垣镰孢菌透明质酸结合蛋白2抗体Human STXBP4 ELISA Kit大鼠高半胱氨酸(Hcy)试剂盒
灰红链霉菌透明质酸及粘蛋白2抗体Human STK24 ELISA Kit大鼠肝脂酶(HL)试剂盒
皮氏罗尔斯通氏菌透明质酸合成酶3抗体Human STK25 ELISA Kit大鼠肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)试剂盒
短小芽孢杆菌热休克蛋白56抗体Human STK31(Serine/threonine-protein kinase 31) ELISA Kit大鼠肝生长因子受体(c-MET/HGFR)试剂盒
固氮菌热休克蛋白70相互作用蛋白抗体Human STK3 ELISA Kit大鼠肝生长因子激活物(HGFA)试剂盒
蜡状芽孢杆菌热休克蛋白相关蛋白4抗体Human STK32A ELISA Kit大鼠肝生长因子(HGF)试剂盒
环棱褐孔菌透明质酸合成酶2抗体Human STK32C ELISA Kit大鼠肝素结合EGF样生长因子(HBEGF)试剂盒
牛副结核分歧杆菌(MPB)检测试剂盒(荧光-PCR法)兔抗羊IgM2'-溴苯乙 2'-Bromoacetophenone >98.0%(GC)Human, Mouse, Rat
兔抗豚鼠IgG4'-溴苯乙 4'-Bromoacetophenone >97.0%(GC)Human, Mouse
兔抗豚鼠IgM3-溴苯酯 Methyl 3-Bromobenzoate >99.0%(GC)Human
兔抗马IgG3-溴苯酯 Methyl 3-Bromobenzoate >99.0%(GC)Human, Mouse
兔抗人IgM4-溴苯 4-Bromobenzoic Acid >98.0%(GC&T)Human, Mouse
兔抗猴IgM4-溴苯 4-Bromobenzoic Acid >98.0%(GC&T)Human, Mouse
兔抗小鼠IgM2-溴苯 2-Bromobenzoic Acid >98.0%(GC&T)Human
兔抗小鼠k链2-溴苯 2-Bromobenzoic Acid >98.0%(GC&T)Human
兔抗长爪沙鼠IgG2-溴苯 2-Bromobenzoic Acid >98.0%(GC&T)Human, Mouse, Rat
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。