使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 类鼻疽伯克霍尔德菌(BP)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64297
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,��扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
大肠埃希氏菌艾滋病病抗体Human SPANXE ELISA Kit大鼠雌三(E3)试剂盒
杆状毛霉结合珠蛋白相关蛋白抗体Human SPA17 ELISA Kit大鼠雌硫酸转移酶(SULT1E1)试剂盒
杂色曲霉L-组氨酸脱羧酶抗体Human SLC29A1(EquilibRative nucleoside transporter 1) ELISA Kit大鼠雌(E)试剂盒
马克斯克鲁维酵母乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白Human Spartin/SPG20 ELISA Kit大鼠雌二受体(ER)试剂盒
鞘氨盒菌属组蛋白H2B.s抗体Human SPACA3 ELISA Kit大鼠雌二(E2)抗体试剂盒
产气肠杆菌组蛋白去乙酰化酶4+5+9抗体Human SPAM1 ELISA Kit大鼠雌二(E2)试剂盒
假单胞菌属热休克蛋白27相关蛋白1抗体Human SPACA1 ELISA Kit大鼠垂草扁桃酸(VMA)试剂盒
马阔里类芽孢杆菌卟胆原脱氨酶抗体Human SPAG11A ELISA Kit大鼠穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)试剂盒
球孢白僵菌异质核糖核蛋白U2样蛋白抗体Human SPANXA2/SPANXA1 ELISA Kit大鼠成纤维生长因子9(FGF9)试剂盒
枯草芽孢杆菌肝癌衍生生长因子2抗体Human SPANXB1 ELISA Kit大鼠成纤维生长因子8(FGF8)试剂盒
球孢链霉菌肝癌相关抗原57抗体Human SPANXC ELISA Kit大鼠成纤维生长因子23(FGF-23)试剂盒
平菇补体C3抗体Human SP6 ELISA Kit大鼠成纤维生长因子13(FGF-13)试剂盒
玫烟色棒束孢甲型流感病血凝素抗体Human SPA17 ELISA Kit大鼠成纤维生长因子10(FGF10)试剂盒
腐皮壳甲状旁腺功能亢进蛋白2/分裂周期73抗体Human SPANXE ELISA Kit大鼠巢蛋白(NID)试剂盒
热带假丝酵母线粒体丝氨酸蛋白酶抗体Human Spartin/SPG20 ELISA Kit大鼠超氧化物歧化酶1,可溶性(SOD1)试剂盒
大西洋鲁杰氏菌/钠超化激活环核苷酸门控通道蛋白2抗体Human SLC29A1(EquilibRative nucleoside transporter 1) ELISA Kit大鼠超氧化物歧化酶[锰],线粒体(SOD2)试剂盒
类鼻疽伯克霍尔德菌(BP)检测试剂盒(荧光-PCR法)脱羧酶蛋白体36 cxorf36抗原L-细辛脂素(标准品)Human, Mouse, Rat
(DTX1) (Deltex protein 1)抗原levatinHuman
DISC1 N端抗原Lup-20(29)-en-28-oic acid, ...Human, Mouse
DISC1 C端抗原Monnieriside GHuman, Mouse, Rat
DR3 死亡受体(抗原)MulticaulisinHuman, Mouse
人瘤病16型E7蛋白抗原N-阿魏酰真蛸Human, Mouse
表皮生长因子受体(抗原)N-苄-(9Z,12Z)-十八碳二烯酰Human, Mouse
天冬氨蛋白酶家族蛋白(水稻蛋白的一种)(抗原)N-苄-(9Z,12Z,15Z)-十八碳三烯酰Human, Mouse
一种新型的胰岛因子(抗原)N-苄十六烷酰Human, Rat
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。