PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 鼻疽伯克霍尔德菌(BM)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64298
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
滑菇热休克蛋白β7抗体Human SPACA1 ELISA Kit大鼠超敏热休克蛋白70(HSP-70)试剂盒
缺陷短波单胞菌/钠超化激活环核苷酸门控通道蛋白3抗体Human SPDYA ELISA Kit大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)试剂盒
毛木耳铁调节蛋白25抗体Human SPHK1 ELISA Kit大鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)试剂盒
大肠杆菌HD域内含蛋白2抗体Human CADM3(Cell adhesion molecule 3) ELISA Kit大鼠叉头框蛋白P3(FoxP3)试剂盒
聚生壳菌艾滋病病p55抗体Human SPHK1-Phospho-Ser225 ELISA Kit大鼠层粘连蛋白亚基γ-2(LAMC2)试剂盒
芽孢杆菌造血激酶抗体Human SPHK2 ELISA Kit大鼠层粘蛋白α1(LAMA1)试剂盒
禾生HEAT重复内含蛋白5B蛋白抗体Human SPI1 ELISA Kit大鼠层连蛋白/板层素(LN)试剂盒
紧密帚枝霉缺氧诱导基因1B蛋白抗体Human SPATA1 ELISA Kit大鼠不对称二甲基精氨酸(ADMA)试剂盒
三叶草根瘤菌乙酰化组蛋白H4抗体Human SPATA13 ELISA Kit大鼠补体因子H(CFH)试剂盒
酿酒酵母热休克蛋白B2抗体Human SPATA16 ELISA Kit大鼠补体因子D(adipsin)(CFD)试剂盒
根瘤菌人类白抗原B27Human SPAG4 ELISA Kit大鼠补体片断5a(C5a)试剂盒
草地阿格雷氏菌螺旋环螺旋转录因子HATH6抗体Human SOX5 ELISA Kit大鼠补体片断5(C5)试剂盒
孢淡灰链霉菌神经调节蛋白1β2抗体Human SOX6( SRY-box 6) ELISA Kit大鼠补体片断3a(C3a)试剂盒
尖孢镰刀菌HDHD3蛋白抗体Human SOX8 ELISA Kit大鼠补体片断3(C3)试剂盒
平田头菇7-2HEATR3蛋白抗体Human SOX7 ELISA Kit大鼠补体蛋白4(C4)试剂盒
肉葡萄球菌(可订)癌增强蛋白抗体Human SP100 ELISA Kit大鼠补体蛋白3(C3)试剂盒
鼻疽伯克霍尔德菌(BM)检测试剂盒(荧光-PCR法)脱羧酶蛋白体36抗体兰索拉唑(标准品) Praziquan
3号染色体开放阅读框78抗体乐卡地平盐盐(标准品) Praziquan
过敏素C5a/补体C5a抗体雷贝拉唑钠(标准品) Prazosin HCl
卵巢癌抗原抗体雷米普利(标准品) Prednisolone acetate
粘附分子相关蛋白a1抗体雷诺(标准品) Prednisone Acetate
21号染色体开放阅读框69抗体雷帕霉素/西罗莫司(标准品) Prednisone Acetate
周期相关激酶抗体藜芦(3,4-二氧苯)(标准品) Pregabalin
癌相关抗原抗体利巴韦林(标准品) Procarbazine HCl
半胱蛋白酶蛋白-6抗体(N端)利多卡因(标准品) Procarbazine HCl