使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 野兔热(Tul)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64303
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
溶血葡萄球菌mRNA cap甲基转移酶抗体Human SMC5 ELISA Kit大鼠阿立新A(Orexin A)试剂盒
解脂假丝酵母解脂变种5’-三磷酸聚核苷酸抗体Human SMC6 ELISA Kit大鼠阿黑皮素原(POMC)试剂盒
芽胞杆菌组氨酸三聚体核苷结合蛋白1抗体Human SMAP1 ELISA Kit大鼠δ氨基乙酰酸脱水酶(ALAD)试剂盒
季也蒙假丝酵母甲状腺促进alpha链Human SMCHD1 ELISA Kit大鼠γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)试剂盒
嗜冷海杆状菌A型流感病H7N9凝集素抗体Human SMAP2 ELISA Kit大鼠γ干扰素受体(IFN-γR)试剂盒
秦氏蜜环菌组蛋白去乙酰化酶3抗体Human SMCR7/MID49 ELISA Kit大鼠γ干扰素(IFN-γ)试剂盒
水生黄杆菌人乙肝表面抗原抗体(包被)Human LMTK3(Serine/threonine-protein kinase LMTK3) ELISA Kit大鼠γ分泌酶试剂盒
鸭疫里氏杆菌肾损伤分子1抗体(甲型肝炎病受体1)Human SMARCA4 ELISA Kit大鼠γ-氨基丁酸受体亚基α1(GABRA1)试剂盒
平脐蠕孢菌组氨酸富含脯氨酸糖蛋白抗体Human SMCR7L ELISA Kit大鼠γ氨基丁酸(GABA)试剂盒
大孢硬皮马勃HER3受体抗体Human SMARCC1 ELISA Kit大鼠β-转导重复相容蛋白(β-TrCP)试剂盒
枯草芽孢杆菌磷酸化HER3受体抗体Human SMARCB1(SWI/SNF-related matrix-associated actin-dependent regulator of chromatin subfamily B member 1) ELISA Kit大鼠β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)试剂盒
塔宾曲霉磷酸化HER3受体抗体Human SMARCD1 ELISA Kit大鼠β素(BTC)试剂盒
产黄青霉磷酸化HER4抗体Human SLC5A3 ELISA Kit大鼠β位淀粉样前体蛋白裂解酶2(BACE2)试剂盒
细纤芽孢杆菌糖蛋白β-1B抗体Human SMARCD2 ELISA Kit大鼠β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)试剂盒
酿酒酵母磷酸化热休克蛋白27抗体Human SLTM ELISA Kit大鼠β羟丁酸(βOHB)试剂盒
孟氏假单胞菌HEAT重复内含蛋白7A蛋白抗体Human SLC6A8 ELISA Kit大鼠β内啡肽受体(β-EPR)试剂盒
野兔热(Tul)检测试剂盒(荧光-PCR法)外生性骨疣样蛋白2抗体(2R,3R)-3,7,4'-三羟-5-氧-8-... Sodium acetate, anhydrate
磷化eIF4E结合蛋白抗体(2R,3S)-3,7,4'-三羟-5-氧-8-... Agarose, low gelling temperature
磷化eIF4E结合蛋白抗体(7S,7'R)-双(3,4-亚二氧苯)-rel-... Potassium phosphate, monobasic, anhydrous
内皮特异性分子1抗体(E)-N-Caffeoylputrescine 6-Benzylamino purine
真核翻译起始因子3F抗体(R,S)-告依春 Water
真核翻译起始因子3H抗体(R型)人参皂苷Rg2(标准品) Maleic acid
真核翻译起始因子4G抗体(R型)人参皂苷Rg3(标准品) Ammonium sulfate
β4整合素结合蛋白抗体(R型)人参皂苷Rh1(标准品) Cesium chloride
食道癌相关因4蛋白抗体(R型)人参皂苷Rh2 Sodium phosphate, dibasic, heptahydrate
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。