PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产品参数:
产品名称: 新孢子虫(Ne)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64299
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
![](https://yt.yzimgs.com/ComFolder/200132334/image/202108/202108051515010801.jpg)
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
![](https://yt.yzimgs.com/ComFolder/200132334/image/202108/202108051515218291.png)
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
总状毛霉单甲基组蛋白H3K9抗体Human SP110 ELISA Kit大鼠补体AH50 试剂盒
青色糖单孢菌HDHD2B蛋白抗体Human ACTN3(Alpha-actinin-3) ELISA Kit大鼠波形蛋白(VIM)试剂盒
暗色节菱孢*造血干特异性相关结合蛋白1抗体Human SOX13 ELISA Kit大鼠酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)试剂盒
豇豆慢生根瘤菌I类组织相容性H-2抗原D-Dalpha链抗体Human SP2 ELISA Kit大鼠二酸单酰辅酶A脱羧酶(MLYCD)试剂盒
橙色杆状菌HEAT重复内含蛋白5A蛋白抗体Human SODD/BAG4 ELISA Kit大鼠二酸单酰辅酶A(malonyl CoA)试剂盒
印度毛壳热休克蛋白70抗体Human SOCS6 ELISA Kit大鼠二(MDA)试剂盒
草木樨中华根瘤菌羟类固脱氢酶17β抗体(17β-HSD8)Human AQPEP(Aminopeptidase Q) ELISA Kit大鼠氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒
牧草红酵母透明质酸结合蛋白4抗体Human Sodium iodide symporter ELISA Kit大鼠别孕烯酮/3α,5α-四氢孕酮(AP/3α,5α-THP)试剂盒
枯草芽孢杆菌A型流感病H5N1凝集素抗体Human SORBS2 ELISA Kit大鼠表皮生长因子受体(EGFR)试剂盒
光滑青霉A型流感病核衣壳蛋白抗体Human SNRPD3 ELISA Kit大鼠表皮生长因子(EGF)试剂盒
土曲霉原变种A型流感病核衣壳蛋白抗体Human ACTN3(Alpha-actinin-3) ELISA Kit大鼠胞外铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD/SOD3)试剂盒
秀珍菇A型流感病核衣壳蛋白抗体Human SP2 ELISA Kit大鼠胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)试剂盒
耶尔森氏菌属B型流感病蛋白抗体Human SOX12 ELISA Kit大鼠膀胱肿瘤抗原(BTA)试剂盒
肠道致病性大肠埃希氏菌人类状瘤病16-E7抗体Human SNX7 ELISA Kit大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)试剂盒
亚罗酵母属跨膜蛋白酶丝氨酸1抗体Human SOAT2 ELISA Kit大鼠白血病抑制因子受体(LIFR)试剂盒
金黄色葡萄球菌肺癌癌基因蛋白3抗体Human SOCS5 ELISA Kit大鼠白血病抑制因子(LIF)试剂盒
新孢子虫(Ne)检测试剂盒(荧光-PCR法)脱羧酶蛋白体36抗体尿激酶型纤溶酶原激活因子受体(uPAR)检测试剂盒uPAR ELISA Kit
间隙连接蛋白40抗体尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)检测试剂盒uPA ELISA Kit
间隙连接蛋白43抗体鸟苷环化酶激活因子2A(GUCA2A)检测试剂盒GUCA2A ELISA Kit
间隙连接蛋白45抗体鸟氨脱羧酶(ODC)检测试剂盒ODC ELISA Kit
表面趋化因子受体1抗体黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM1)检测试剂盒MAdCAM1 ELISA Kit
色素P450单氧化酶抗体尼克酰腺嘌呤二核苷磷氧化酶4(NOX4)检测试剂盒NOX4 ELISA Kit
色素C抗体尼克酰腺嘌呤二核苷磷氧化酶1(NOX1)检测试剂盒NOX1 ELISA Kit
角蛋白1抗体尼克酰-N-转移酶(NNMT)检测试剂盒NNMT ELISA Kit
巨病PP65/CMV低质磷脂蛋白抗体内脂素(VF)检测试剂盒VF ELISA Kit