使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 猫支原体(MF)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64310
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守��。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
Rhizobium alkalisoliHHIP蛋白抗体Human SKIV2L2 ELISA Kit大鼠CD8分子(CD8)试剂盒
节杆菌亚铁氧化酶抗体Human SKIL ELISA Kit大鼠CD68分子(CD68)试剂盒
所多玛盐红菌鸟苷酸释放因子p532蛋白抗体Human SKIV2L ELISA Kit大鼠CD63分子(CD63)试剂盒
山梨木糖假丝酵母HERC2 E3泛素蛋白连接酶抗体Human SIN3A ELISA Kit大鼠CD4分子(CD4)试剂盒
阳还原地杆菌HERC3 E3泛素蛋白连接酶抗体Human SKP1 ELISA Kit大鼠CD45分子(CD45)试剂盒
稻梨孢HERC4 E3泛素蛋白连接酶抗体Human MUC12(Mucin-12) ELISA Kit大鼠CD44分子(CD44)试剂盒
赤霉菌HERC6 E3泛素蛋白连接酶抗体Human SIP1 ELISA Kit大鼠CD34分子(CD34)试剂盒
核黄素德沃斯氏菌MMF诱导片段蛋白1抗体Human SIGLEC6 ELISA Kit大鼠CD30分子(CD30)试剂盒
豇豆慢生根瘤菌HERPUD蛋白家族成员2抗体Human SIGLEC7 ELISA Kit大鼠CD19分子(CD19)试剂盒
苏云金芽孢杆菌尿黑酸氧化酶抗体Human SIGLEC9 ELISA Kit大鼠CD117分子(CD117)试剂盒
土壤伯克氏菌肝生长调节因子酪氨酸激酶底物抗体Human SIGMAR1 ELISA Kit大鼠CC趋化因子受体9(CCR9)试剂盒
黑曲霉T2识别黑色素瘤抗原抗体Human SIKE1 ELISA Kit大鼠C-C趋化因子6(CCL6)试剂盒
亮白曲霉肝癌HHCM蛋白抗体Human SIL1 ELISA Kit大鼠CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)试剂盒
黄曲霉紫外切除修复蛋白RAD23A抗体Human SHOX ELISA Kit大鼠B因子(BF)试剂盒
黄色毛霉紫外切除修复蛋白RAD23B抗体Human SH3GL2 ELISA Kit大鼠B瘤因子2(Bcl-2)试剂盒
小红酵母3-羟基异丁酸脱氢酶抗体Human SIM2 ELISA Kit大鼠Bκ轻肽基因增强子抑制因子,激酶β (IKBKB)试剂盒
猫支原体(MF)检测试剂盒(荧光-PCR法)晚期糖化终末产物特异性受体抗体解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)检测试剂盒ADAM8 ELISA Kit
ADCK5蛋白抗体解脲脲原体抗体(UU-Ab)检测试剂盒UU-Ab ELISA Kit
艾滋病病复制结合蛋白抗体睫状神经营养因子(CNTF)检测试剂盒CNTF ELISA Kit
AFP4b蛋白抗体结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)检测试剂盒Hpt/HP ELISA Kit
HIV-1病复制结合蛋白2抗体结缔组织生长因子(CTGF)检测试剂盒CTGF ELISA Kit
伴侣蛋白bc1同源复合体抗体结蛋白(Des)检测试剂盒Des ELISA Kit
心肌锚蛋白重复结构域1抗体窖蛋白Caveolin1(Cav-1)检测试剂盒Cav-1 ELISA Kit
抑制蛋白结构域蛋白1抗体角化细胞生长因子(KGF/FGF-7)检测试剂盒KGF/FGF-7 ELISA Kit
抑制蛋白结构域蛋白2抗体角化细胞***因子(KAF)/双调蛋白(AR)检测试剂盒AR ELISA Kit
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。