使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 犬衣原体(CP)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64314
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守��。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
浸麻类芽孢杆菌丝氨酸羧甲半胱氨酸合成酶抗体Human SF3A3 ELISA Kit大鼠Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)试剂盒
解淀粉芽孢杆菌癌高表达蛋白Hec1抗体Human SF3A2 ELISA Kit大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)试剂盒
腐皮镰孢磷酸化***敏感脂肪酶抗体Human SF3B14 ELISA Kit大鼠Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)试剂盒
微枝形杆菌组蛋白去乙酰化酶1抗体Human HYAL3(Hyaluronidase-3) ELISA Kit大鼠17-酮类固(17-KS)试剂盒
酿酒酵母半乳糖基转移酶2抗体Human SF3B4 ELISA Kit大鼠17-羟孕烯酮试剂盒
小果豆包菌磷酸化异染色质蛋白1抗体(果蝇)Human SF3B2 ELISA Kit大鼠17羟孕酮(17-OHP)试剂盒
恶臭假单胞菌异染色质蛋白1磷酸化抗体(果蝇)Human SF3B3 ELISA Kit大鼠17羟皮质类固(17-OHCS)试剂盒
噬果胶黄杆菌缺氧诱导因子2α /HIF-2α抗体Human SF3B5 ELISA Kit大鼠17-α甲睾酮(17-αMT)试剂盒
酿酒酵母甲型流感病M2抗体Human SFT2D3 ELISA Kit大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)试剂盒
顶青霉热休克蛋白-47抗体Human SFXN1 ELISA Kit大鼠12羟二十烷四烯酸(12-HETE)试剂盒
梨红菇人类状瘤病16抗体Human SFXN2 ELISA Kit大鼠11β羟类固脱氢酶1型(11β-HSD1)试剂盒
环状芽孢杆菌缺氧诱导因子1α 抗体HIF-1αHuman SFXN3 ELISA Kit大鼠1,4,5-三磷酸肌(IP3)试剂盒
瑟氏泰勒虫(宁县株)组蛋白H3抗体Human BCO2(Beta,beta-carotene 9′,10′-oxygenase) ELISA Kit大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD glucosidase)试剂盒
鲁氏接合酵母人类疱疹病8抗体/疱疹病8型Human SGCE ELISA Kit大鼠1,25-二羟维生素D(3)24-羟化酶,线粒体(CYP24A1)试剂盒
食环氧化物交替红色杆菌人类巨病抗体Human SGF29 ELISA Kit大鼠1,25二羟基维生素D3(1,25 DHVD3)试剂盒
孟氏假单胞菌人类疱疹病8抗体Human SGCG ELISA Kit大鼠 SCUBE1 试剂盒
犬衣原体(CP)检测试剂盒(荧光-PCR法)微管相关蛋白样蛋白3抗体荧光素钠(标准品) Sephadex G-50
内皮抑素/内皮他丁抗体右雷佐生;右亚(标准品) Sephadex G-50
雌**受体β抗体右旋兰索拉唑(标准品) (S)-(+)-Mandelic acid
雌**受体α抗体右佐匹克隆(标准品) (R)-(−)-Mandelic acid
内质网Aβ相关结合蛋白抗体鱼腥草素钠(标准品) 1-Aminohydantoin Hydrochloride
Ephrin A2抗体愈创甘油(标准品) 1-Aminohydantoin Hydrochloride
大肠埃希菌菌体蛋白抗体愈创木酚磺(标准品) ACTH (1-24), human
雌**硫转移酶抗体远华蟾蜍精(标准品) Bradykinin
E Tag标签抗体月桂(标准品) Bradykinin acetate
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。