使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 牛结节性皮肤病(LSDV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64316
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
血红拟革盖菌肝生长因子激活物抑制剂抗体Human SERPINI2 ELISA Kit仓鼠甲状腺结合球蛋白(TBG)试剂盒
高温金针菇HA tag标签单克隆抗体Human BIRC2(Baculoviral IAP repeat-containing protein 2) ELISA Kit仓鼠低密度脂蛋白(VLDL)试剂盒
纺织品 纤维含量(棉与莫代尔纤维)血红素抗体Human SETD1B ELISA Kit仓鼠基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B) 试剂盒
黄曲霉戊型肝炎病抗体Human SERPINB8 ELISA Kit仓鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)试剂盒
酿酒酵母神经调节蛋白1抗体Human SERPINB9 ELISA Kit仓鼠核因子κB(NF-κB)试剂盒
枯草芽孢杆菌神经胶质生长因子/神经调节蛋白β抗体Human SERPIND1(Serpin family D member 1) ELISA Kit仓鼠谷胱甘肽过氧化物酶3(GPX3)试剂盒
枯草芽孢杆菌组氨酸三聚体核苷结合蛋白1抗体Human BIRC2(Baculoviral IAP repeat-containing protein 2) ELISA Kit仓鼠促卵泡素(FSH)试剂盒
发酵乳杆菌(现货)组蛋白去乙酰化酶3抗体Human SERPINI2 ELISA Kit仓鼠二(MDA)试剂盒
单核增生利斯特菌高度发散同源异型盒蛋白抗体Human SERINC1 ELISA Kit仓鼠白介素8(IL-8/CXCL8)试剂盒
宇佐美曲霉腺病六邻体蛋白抗体Human SERINC2 ELISA Kit仓鼠白介素6(IL-6)试剂盒
龟裂链霉菌高密度脂蛋白结合蛋白抗体Human SERF2 ELISA Kit仓鼠白介素3(IL-3)试剂盒
多源中间根瘤菌转录因子HNF-3α抗体Human SENP1 ELISA Kit仓鼠白介素2(IL-2)试剂盒
酿酒酵母热休克蛋白β7抗体Human GAL(Galanin peptides) ELISA Kit仓鼠白介素1β(IL-1β)试剂盒
微球菌E3连接酶抑制素受体2抗体Human SENP3 ELISA Kit仓鼠白介素1α(IL-1α)试剂盒
芽孢杆菌透明质酸及粘蛋白3抗体Human SENP5 ELISA Kit仓鼠γ干扰素(IFNG)试剂盒
臭曲霉22号染色体开放阅读框28抗体Human CFP(Properdin) ELISA Kit仓鼠N端前脑钠素(NT-proBNP)试剂盒
牛结节性皮肤病(LSDV)检测试剂盒(荧光-PCR法)微粒体甘油三酯转运蛋白石菖蒲(标准品) Ginsenoside Rd
单酰甘油脂肪酶抗体石吊兰(标准品) Gliquidone
致癌因n-Myc抗体石吊兰素 Gliquidone
多药耐药相关蛋白3抗体石斛酚(标准品) Ginsenoside Rf
线粒体转录终止因子1抗体石斛(标准品) Ginsenoside Rg1
蛋白激酶MST2抗体石见穿(标准品) 20(R)Ginsenoside Rg2
DNA结合蛋白C抗体石椒草(标准品) Ginsenoside Rg2
胃粘液素抗体石榴皮(标准品) 20(R)Ginsenoside Rg3
促黑**γ抗体石榴皮鞣素;安石榴林(标准品) Ginsenoside Rg3
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。