使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 羊传染性胸膜肺炎(MPSG)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64317
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关��。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
茄镰孢14号染色体开放阅读框94抗体Human SEPHS1 ELISA Kit仓鼠E选择素(SELE)试剂盒
交链孢属四磷酸鸟苷水解酶抗体Human BGN(Biglycan) ELISA Kit骆驼ELISA试剂盒
假丝酵母属人类缺陷病2型/2型艾滋病病gp36抗体Human SERAC1 ELISA Kit骆驼转化生长因子β2(TGFβ2)试剂盒
大豆慢生根瘤菌上调神经肿瘤相关激酶抗体Human SERINC2 ELISA Kit骆驼脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)试剂盒
双孢蘑菇β氨基己糖苷酶A抗体Human SERINC1 ELISA Kit骆驼天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒
空肠弯曲杆菌肌侧索硬化症相关蛋白HECW1抗体Human SERF2 ELISA Kit骆驼过氧化氢酶试剂盒
烟色毛霉3-羟氨苯甲酸双加氧酶抗体Human SEMA3C ELISA Kit骆驼谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒
Gillisia limnaea舞蹈症相关蛋白40/凝血因子8相关蛋白/第八因子相关蛋白抗体Human SELK ELISA Kit骆驼氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒
大肠埃希菌舞蹈症相关相互作用蛋白1/雌相关受体样蛋白1抗体Human SEMA4B ELISA Kit骆驼β内啡肽(β-EP)试剂盒
柳巴克利酵母舞蹈症蛋白相互作用蛋白13抗体Human SEMA3D ELISA Kit裸鼠ELISA试剂盒
德尔布有孢酵母神经性舞蹈病蛋白抗体Human SEC5/EXOC2 ELISA Kit裸鼠克拉拉蛋白(CC16)试剂盒
绿针假单胞菌舞蹈症相关蛋白1抗体Human SEMA4A ELISA Kit裸鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)试剂盒
黄多孔菌亨廷顿(舞蹈症)相互作用蛋白1抗体Human SEC61alpha ELISA Kit裸鼠环加氧酶2(COX-2)试剂盒
粪肠球菌葡萄糖氧化酶1抗体Human SDSL ELISA Kit驴ELISA试剂盒
阿孙链霉菌转录调节因子HOXD9抗体Human SEC11A ELISA Kit驴孕/孕酮(PROG)试剂盒
同丝毛壳羟基酰谷胱甘肽水解酶样蛋白抗体Human SEC13 ELISA Kit驴透明质酸(HA)试剂盒
羊传染性胸膜肺炎(MPSG)检测试剂盒(荧光-PCR法)微丝相关蛋白hHBrk1抗体盐黄柏(标准品) O-tert-Butyl-L-threonine methyl ester hydrochloride
植烷酰辅酶A羟化酶2抗体盐黄连(标准品) L-Alanine isopropyl ester hydrochloride
A型流感病H9N1神经氨酶型抗体盐毛果芸香(标准品) Methyl L-asparaginate monohydrochloride
A型流感病H9N1血凝素型抗体盐青藤(标准品) L-Aspartic acid di-tert-butyl ester hydrochloride
人类状瘤病33抗体盐去氢骆驼蓬(标准品) L-Glutamine t-butyl ester hydrochloride
A型病H1N1蛋白抗体盐石蒜(标准品) L-Glutamic acid 5-tert-butyl 1-methyl ester hydrochloride
型肝炎病聚蛋白VP1抗体盐甜菜(标准品) Bzl-Gly-OH·HCl
造血干特异性蛋白抗体盐小檗(标准品) Glycine benzyl ester hydrochloride
转化生长因子β1诱导转录因子1抗体盐小檗(标准品) L-Isoleucine t-butyl ester hydrochloride
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。