使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64321
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配���原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
嗜盐四联球菌磷酸化组蛋白H3抗体Human SCN10A ELISA Kit鲑鱼补体蛋白3(C3)试剂盒
谷氨酸棒状杆菌(黄色短杆菌)*磷酸化组蛋白H3抗体Human SCML2 ELISA Kit狗ELISA试剂盒
大肠埃希菌磷酸化组蛋白H3抗体Human SCARA5 ELISA Kit狗微管相关蛋白tau(MAPT)试剂盒
福山假丝酵母组蛋白去乙酰化酶5抗体Human SCN2B ELISA Kit狗氨基乙酰酸,delta-脱水酶(ALAD)试剂盒
鸭疫里氏杆菌A型流感病H5N1凝集素Human SCARF1 ELISA Kit狗15 - 酮基-13,14-二氢前列腺素F2α(15-keto-13,14-dihydro-PGF2α)试剂盒
橙色杆状菌人巨病UL49蛋白抗体Human MUC15(Mucin-15) ELISA KitELISA试剂盒
褐球固氮菌*肝核因子1β/HNF-1β抗体Human SCCPDH ELISA Kit脂联素(ADP)试剂盒
埃切毕赤酵母HHLA3蛋白抗体Human SART1 ELISA Kit胃泌素(Gastrin)试剂盒
球孢白僵菌HHIP样蛋白2抗体Human SCEL ELISA Kit胃动素(MTL)试剂盒
多分枝灵芝A型流感病H3N2-M2蛋白抗体Human SART3 ELISA Kit白蛋白(Albumin)试剂盒
植物乳杆菌HSH2D抗体Human SAT2 ELISA Kit5羟色(5-HT)试剂盒
美澳型核果褐腐病菌水蛭素抗体Human SAMM50 ELISA Kit鹅ELISA试剂盒
犁黑轮斑交链孢霉白抗原A抗体Human SASS6 ELISA Kit鹅维生素D3(VD3)试剂盒
季也蒙迈耶氏酵母人瘤病16型E7抗体Human A1BG(Alpha-1B-glycoprotein) ELISA Kit鹅降钙素(CT)试剂盒
空肠弯曲杆菌人类状瘤病58 E6蛋白抗体Human SATB1 ELISA Kit鹅骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)试剂盒
宇佐美曲霉人类状瘤病16抗体Human SATB2(Special AT-rich sequence-binding protein 2) ELISA Kit鹅钙结合蛋白(CR)试剂盒
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)检测试剂盒(荧光-PCR法)味觉感受器蛋白T2R38抗体卡铂 CARBOPLATIN(RG)Human
5色氨羟化酶2抗体卡铂 CARBOPLATIN(RG)Human, Mouse, Rat
硫氧还蛋白11抗体CARBOLINE-1-PROPIONIC ACID, B-(SH)Human
微管蛋白4α抗体CARBOLINE-1-PROPIONIC ACID, B-(SH)Human, Mouse
动力蛋白轻链CARBENOXOLONE(RG)Human
肿瘤坏死因子诱导蛋白8样蛋白2/TNFα-IP 8L2抗体鼠尾草酚 CARNOSOL(P)Human, Mouse, Rat
血小板**素受体抗体鼠尾草酚 CARNOSOL(P)Human
跨膜丝氨蛋白酶5抗体鼠尾草酚 CARNOSOL(P)Human, Mouse
脱中胚蛋白抗体鼠尾草酚 CARNOSOL(P)(REQUEST QUOTE)Human, Mouse, Rat
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。