使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 牛流行热病毒(BEFV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64328
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
樟疫霉血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗体Human RPS19(Ribosomal protein S19) ELISA Kit鱼肝生长因子(HGF)试剂盒
深层大洋芽孢杆菌白介素17受体C抗体Human RPS20 ELISA Kit鱼钙调磷酸酶(CaN)试剂盒
病臭肠球菌球蛋超家族成员8抗体Human RPP21 ELISA Kit鱼酚氧化酶(PO)试剂盒
薄花边伞2-4白介素33抗体Human RPLP0 ELISA Kit鱼多巴(DA)试剂盒
玉米大斑病菌核蛋白9抗体(Ran结合蛋白M)Human RPP38 ELISA Kit鱼胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)试剂盒
虫形珊瑚菌真核翻译起始因子3A抗体Human RPP25 ELISA Kit鱼催乳素(PRL/LTH)试剂盒
荧光假单胞菌磷酸化真核翻译起始因子4G抗体Human RPRD1B ELISA Kit鱼促肾上腺皮质(ACTH)试剂盒
枯草芽胞杆菌枯草亚种整合素α4β7抗体Human RPL7L1 ELISA Kit鱼促甲状腺素(TSH)试剂盒
Candidatus Rhizobium磷酸化干扰素调节因子3抗体Human RPS10 ELISA Kit鱼雌二(E2)试剂盒
节杆菌ISLR2蛋白抗体Human RPL8 ELISA Kit鱼超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒
动物双歧杆菌IQCG蛋白抗体Human RPLP0 ELISA Kit鱼补体蛋白4(C4)试剂盒
大肠埃希氏菌IQCK蛋白抗体Human RPL9 ELISA Kit鱼补体蛋白3(C3)试剂盒
大肠埃希氏杆菌DNA结合抑制因子1抗体Human RPL9 ELISA Kit鱼胞浆型磷脂酶A2A(cPLA2A)试剂盒
隆氏针层孔菌肌苷单磷酸脱氢酶1抗体Human RPL8 ELISA Kit鱼白三烯B4(LTB4)试剂盒
深红酵母干扰素诱导蛋白P78抗体Human DPP3(Dipeptidyl peptidase 3) ELISA Kit鱼白介素8(IL-8/CXCL8)试剂盒
碱线菌属间粘附分子5抗体Human RPL32 ELISA Kit鱼白介素6(IL-6)试剂盒
牛流行热病毒(BEFV)检测试剂盒(荧光-PCR法)乌药Human
乌药内酯(标准品)Human, Mouse
乌药内酯Human
乌贼墨(标准品)Human, Mouse
吴茱萸(标准品)Human, Mouse
吴茱萸次(标准品)Human, Mouse, Rat
吴茱萸(标准品)Human, Mouse, Rat
广谱SP**组化检测试剂盒(用于检测兔、大鼠、小鼠和豚鼠来源的一抗)梧桐子(标准品)Human
SP**组化检测试剂盒(兔)五倍子(标准品)Human, Mouse, Rat
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。