使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 赤羽病病毒(AKAV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64338
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
头状丝孢酵母Iroquois同源蛋白5抗体Human RFK ELISA Kit总蛋白C(TPC)ELISA试剂盒
胶孢镰孢整合素αE抗体Integrin αEHuman REEP5 ELISA Kit总胆汁酸(TBA)ELISA试剂盒
浅紫灰链霉菌产色变种间粘附分子-2抗体Human REEP2 ELISA Kit自然杀伤(NK)ELISA试剂盒
酱油曲霉整合素β3抗体Human REEP6 ELISA Kit自然抗性相关巨噬蛋白2(NRAMP-2)ELISA试剂盒
杂色曲霉整合素α4抗体Human RELT ELISA Kit自然抗性相关巨噬蛋白1(NRAMP-1)ELISA试剂盒
猪丹丝菌白介素15抗体Human RGS4 ELISA Kit桩蛋白(Pax)ELISA试剂盒
假单胞菌属磷酸化白介素-1受体相关激酶1抗体Human REM2 ELISA Kit转移因子(TF)ELISA试剂盒
平菇新农1号一氧化氮合成酶-2抗体(诱导型)Human RFTN1 ELISA Kit转铁蛋白受体(TFR/CD71)ELISA试剂盒
沙针草状孢菌干扰素α6抗体Human RFX3 ELISA Kit转录中介因子1-β(TRIM28/KAP1/RNF96/TIF1B)ELISA试剂盒
灰红链霉菌整合素β2/Integrin β2抗体Human RFWD3 ELISA Kit转录因子抗体-1(ATF-1)ELISA试剂盒
茄拉尔氏菌抑制素A/Inhibin βA抗体Human RFTN2 ELISA Kit转录因子SOX-5(SOX5)ELISA试剂盒
胶质芽孢杆菌*胰岛素受体底物-3抗体Human RFX5 ELISA Kit转录因子SOX-4(SOX4)ELISA试剂盒
酿酒酵母胰岛素受体底物p53蛋白抗体Human RFXAP ELISA Kit转录因子1(AP-1)ELISA试剂盒
红法夫酵母*胰岛素受体底物-1抗体Human RGS1(Regulator of G-protein signaling 1) ELISA Kit转甲状腺素蛋白(TTR)ELISA试剂盒
布莱克威尔假丝酵母胰岛素受体底物-2抗体Human RGR ELISA Kit转化生长因子-β诱导蛋白IG-H3(TGFBI/BIGH3)ELISA试剂盒
猪丹丝菌胰岛素受体底物-4抗体Human RGMA ELISA Kit转化生长因子β受体3(TGFBR3)ELISA试剂盒
赤羽病病毒(AKAV)检测试剂盒(荧光-PCR法)纤溶酶原激活物抑制剂1 RNA结合蛋白抗体二乙二二乙 Diethylene Glycol Diethyl Ether >98.0%(GC)Human, Mouse, Rat
剪接因子,精氨/丝氨丰富19双(2,4-二)二硫 Bis(2,4-dinitrophenyl) Disulfide >80.0%(LC)Human
可溶性血管内皮生长因子受体2抗体二硫化四秋兰姆 Tetramethylthiuram Disulfide >97.0%(T)Human, Mouse, Rat
S腺苷L-同型半胱氨水解酶抗体N,N-二(2-羟乙)甘氨[生物研究用Good's缓冲液中的成分] N,N-Di(2-hydroxyethyl)glycine [Good's buffer component for biological research]>99.0%(T)Human, Mouse, Rat
磷化Smad2抗体N,N-二(2-羟乙)甘氨[生物研究用Good's缓冲液中的成分] N,N-Di(2-hydroxyethyl)glycine [Good's buffer component for biological research]>99.0%(T)Human, Mouse, Rat
磺酰脲类**受体1抗体N,N-二(2-羟乙)甘氨[生物研究用Good's缓冲液中的成分] N,N-Di(2-hydroxyethyl)glycine [Good's buffer component for biological research]>99.0%(T)Human, Rat
突触泡蛋白2A抗体双[4-(二氨)苯] Bis[4-(dimethylamino)phenyl]methane >98.0%(GC&T)Human, Mouse, Rat
突触融合蛋白1抗体双[4-(二氨)苯] Bis[4-(dimethylamino)phenyl]methane >98.0%(GC&T)Human
磷化核突触蛋白α抗体宾雪德拉氏绿隐色 Bindschedler's Green Leuco Base >98.0%(LC&T)Human, Mouse, Rat
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。