使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 麻疹病毒(MV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64341
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
产气肠杆菌(现1)抑制素A/Inhibin α抗体Human RBM24(RNA Binding Motif Protein 24) ELISA Kit肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体3(TRAIL-R3)ELISA试剂盒
布鲁氏菌鸡传染性喉气管炎病糖蛋白E抗体Human RBMS2 ELISA Kit肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2(TRAIL-R2/DR5)ELISA试剂盒
不规则盐海菌小肠型脂肪酸结合蛋白抗体Human RBM25 ELISA Kit肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA试剂盒
金针菇(毛柄菌、冬菇)白介素-7受体a抗体Human RBM26 ELISA Kit肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA试剂盒
画眉草弯孢整合素α3抗体Human RBP2 ELISA Kit肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)ELISA试剂盒
壳菌整合素β5抗体Human ABCB5(ATP-binding cassette sub-family B member 5) ELISA Kit肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)ELISA试剂盒
枯草芽胞杆菌整合素α1抗体Human RBMX2 ELISA Kit肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)ELISA试剂盒
紫红曲霉白介素2受体β链抗体 IL-2RβHuman RBM39 ELISA Kit肿瘤坏死因子受体相关因子1(TRAF1)ELISA试剂盒
pBlueScript SK(+)干扰素α2b抗体Human RBM28 ELISA Kit肿瘤坏死因子受体超家族成员18(TNFRSF18)ELISA试剂盒
马赛菌属诱导协同激分子配体CD275抗体Human RBM4 ELISA Kit肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA试剂盒
狭霉素链霉菌鸡传染性法氏囊病病抗体Human RBM42 ELISA Kit肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA试剂盒
冷温木拉克酵母白介素-17抗体Human RBM46 ELISA Kit肿瘤坏死因子超家族15(TL1A/TNFSF15)ELISA试剂盒
松口蘑5'肌苷磷酸脱氢酶2抗体Human RBM41 ELISA Kit肿瘤坏死因子γ(TNFγ)ELISA试剂盒
大豆慢生根瘤菌即刻早期应答基因5样蛋白抗体Human RASGRP3(Ras guanyl-releasing protein 3) ELISA Kit肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒
肠球菌属整合素αV抗体Human RBM14 ELISA Kit肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒
泡盛曲霉白介素-19抗体Human RBM15 ELISA Kit肿瘤坏死因子α转化酶(TACE)ELISA试剂盒
麻疹病毒(MV)检测试剂盒(荧光-PCR法)纤维母表面蛋白抗体五加苷E(标准品) Aluminum oxide, active
前列腺素E受体4相关蛋白抗体五加皂苷B(标准品) Aluminum oxide, active
FLAG Tag标签抗体(N端)楤木(标准品) Aluminum potassium sulfate docecahydrate
成纤维生长因子受体2抗体楤木皂苷A Amikacin
成纤维生长因子受体4抗体粗叶悬钩子甙 Aminophyllin hydrate
凝血酶原酶(纤维介素)抗体醋辛酯(标准品) Ammonium bismuth citrate, hydrate
衰老关键蛋白抗体**斯菊苷,芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(标准... Ammonium bromide
凋亡调节因之一抗体大车前苷(标准品) Ammonium iodide
凋亡调节因之一抗体(短型)大豆苷,黄豆苷 (标准品) Ammonium iron(II) sulfate, hexahydrate
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。