使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 猫传染性腹膜炎(FIP)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64342
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
泡菜大洋芽胞杆菌白介素3抗体Human RASIP1 ELISA Kit肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒
假单胞菌白介素3受体a链抗体Human RASAL2 ELISA Kit肿瘤坏死因子α(TNFα)ELISA试剂盒
秀珍菇白介素-5受体α链抗体IL-5RαHuman RASSF4 ELISA Kit肿瘤关联钙信号转导因子2(TACSTD2)ELISA试剂盒
黑曲霉白介素-10受体β抗体Human RBBP6 ELISA Kit肿瘤蛋白p53(TP53)ELISA试剂盒
气微菌白介素-12受体β1抗体Human RASEF ELISA Kit肿瘤标志物(CA724)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌白介素-12受体β2抗体Human RASGEF1A ELISA Kit中性内肽酶/脑啡肽酶(NEP)ELISA试剂盒
绿粘帚霉白介素15受体α抗体Human RBBP8 ELISA Kit中性粒趋化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA试剂盒
*匍枝根霉白介素17受体抗体Human RBBP9 ELISA Kit中性粒明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒
黄玫瑰色诺卡氏菌白介素-17B受体抗体Human RBM10 ELISA Kit中性粒明胶酶相关脂质运载蛋白(Lipocalin-2/NGAL)ELISA试剂盒
冷海水黄杆菌白介素-18受体β链抗体Human RBM14 ELISA Kit中性粒颗粒抗体(ANGA)ELISA试剂盒
洋葱伯克霍尔德菌白介素21抗体Human RASGRF1 ELISA Kit中性粒抗体(ANA)ELISA试剂盒
扶桑本森顿酵母白介素21受体抗体Human RASGEF1B ELISA Kit中性粒碱性磷酸酶(NAP)ELISA试剂盒
粗糙脉孢菌白介素-22抗体Human RBM11 ELISA Kit中性粒防御素3(DEFA3)ELISA试剂盒
解脂亚罗酵母白介素29抗体Human RASIP1 ELISA Kit中性粒防御素1-3(HNP1-3)ELISA试剂盒
草菇白介素22受体结合蛋白抗体Human RASSF4 ELISA Kit中性粒弹性蛋白酶(NE)ELISA试剂盒
盐水球形菌白介素-1受体相关激酶4抗体Human RBM15 ELISA Kit中心体纺锤体相关蛋白1(CSPP1)ELISA试剂盒
猫传染性腹膜炎(FIP)检测试剂盒(荧光-PCR法)纤维母生长因子5抗体大黄素(标准品) Barium sulfate
脆性X综合征相关蛋白AFF1抗体大黄素-8-β-D-吡喃葡萄糖苷(标准品) Benzenesulfonic acid
感觉神经蛋白1抗体大黄素(标准品) Benzoin
线粒体型共济失调蛋白抗体大黄 Benzophenone hydrazone
FC段IgE受体α多肽抗体大黄(标准品) Bismuth (III) chloride
FAM81A蛋白抗体大戟因子L1(标准品) Bismuth (III) citrate
FAM78B蛋白抗体大蓟(标准品) Bismuth (III) potassium iodide
9号染色体开放阅读框59抗体大蓟苷(标准品) Bismuth (III) sulfate
FAM76A蛋白抗体大麦芽(标准品) Bismuth(III) subcarbonate basic
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。