使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 无乳链球菌(StA)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64350
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模���与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
慢生根瘤菌胰岛素样生长因子结合蛋白样1抗体Human PTBP2 ELISA Kit抑瘤素M(OSM)ELISA试剂盒
嗜松青霉球蛋白D重链保守区抗体Human PSTPIP1 ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白R(hnRNP R)ELISA试剂盒
胶孢IV型己糖激酶抗体Human PTBP1 ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白P2(hnRNP P2)ELISA试剂盒
大肠埃希氏菌宿主球蛋白lambda样肽1抗体Human PTCD3 ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白M(hnRNP M)ELISA试剂盒
美澳型核果褐腐病菌NF-kappa-B抑制子beta抗体Human PTCH1 ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白L(hnRNP L)ELISA试剂盒
灰略红链霉菌NF-kappa-B抑制子epsilon抗体Human PTCH2 ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白K(hnRNP K)ELISA试剂盒
棱柱散尾菌中华变型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶ICK抗体Human PTAFR ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白I(hnRNP I/PTB)ELISA试剂盒
日内瓦毛霉纤毛内转运同源蛋白172抗体Human PTBP1 ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白H(hnRNP H)ELISA试剂盒
朱红栓菌丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶ICK抗体Human PTBP2 ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白G(hnRNP G)ELISA试剂盒
慢生根瘤菌肽酰tRNA水解酶ICT1抗体Human PTCD3 ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白E(hnRNP E)ELISA试剂盒
解脂亚罗酵母alpha干扰素诱导蛋白27抗体Human PTCH1 ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白D(hnRNP D)ELISA试剂盒
弗氏柠檬酸杆菌纤毛内转运同源蛋白81抗体Human PTCH2 ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白C(hnRNP C)ELISA试剂盒
鸭疫里氏杆菌Gamma干扰素诱导蛋白16抗体Human PSME4 ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白A3(hnRNP A3)ELISA试剂盒
焦曲霉异柠檬酸脱氢酶3 beta亚基抗体Human PSME3 ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白A2/B1(hnRNP A2/B1)ELISA试剂盒
贻贝弧菌干扰素诱导的三角形四肽重复蛋白1抗体Human PSMF1 ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白A1(hnRNP A1)ELISA试剂盒
苏云金芽孢杆菌异柠檬酸脱氢酶gamma亚基抗体Human PSMG2 ELISA Kit异质性胞核核糖核蛋白A0(hnRNP A0)ELISA试剂盒
无乳链球菌(StA)检测试剂盒(荧光-PCR法)酰辅酶A脱氢酶很长链抗体维生素D2(VD2)检测试剂盒VD2 ELISA Kit
信号转导衔接结合蛋白抗体维生素D(VD)检测试剂盒VD ELISA Kit
锚蛋白重复序列-因子信号抑制物盒蛋白家族3抗体维生素C(VC)检测试剂盒VC ELISA Kit
有丝分裂激酶B抗体维生素B6(VB6)检测试剂盒VB6 ELISA Kit
磷化Ack1抗体维生素B12(VB12)检测试剂盒VB12 ELISA Kit
磷化Ack1抗体维生素A(VA)检测试剂盒VA ELISA Kit
磷化β抑制蛋白1抗体微管相关蛋白1A/1B轻链3B(MAP1LC3B)检测试剂盒MAP1LC3B ELISA Kit
磷化有丝分裂激酶A抗体微管蛋白β3(TUBB3)检测试剂盒TUBB3 ELISA Kit
磷化APS抗体网膜素(omentin)检测试剂盒omentin ELISA Kit
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。