使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 停乳链球菌(StD)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64351
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
旋毛壳Bipped B样蛋白抗体Human UBA3(NEDD8-activating enzyme E1 catalytic subunit) ELISA Kit异质型核糖核蛋白复合物/抗RA33抗体(hnRNP/RA33)ELISA试剂盒
茎点霉属艾杜糖-2-硫酸酯酶抗体Human PSPC1(Paraspeckle component 1) ELISA Kit异质核糖核蛋白Q(SYNCRIP/HNRPQ/NSAP1)ELISA试剂盒
鲍姆木层孔菌α-L-艾杜糖苷酶抗体Human PSMG3 ELISA Kit异锁链素(IDES)ELISA试剂盒
胞外多聚物鞘氨单胞菌纤毛内转运同源蛋白122抗体Human PSPH ELISA Kit异柠檬酸脱氢酶(ICD)ELISA试剂盒
地衣芽孢杆菌纤毛内转运同源蛋白140抗体Human PSMD6 ELISA Kit异常凝血酶原(APT)ELISA试剂盒
福氏志贺氏菌纤毛内转运同源蛋白20抗体Human PSMD7 ELISA Kit异肾上腺素(iso-Hyd)ELISA试剂盒
稻绿核菌纤毛内转运同源蛋白43抗体Human PSME2 ELISA Kit乙酰乙酸(ACAC)ELISA试剂盒
葡萄座腔菌纤毛内转运同源蛋白80抗体Human PSME1 ELISA Kit乙酰肝素酶(HPA)ELISA试剂盒
突孢毛壳CD101抗体Human PSMC4(Proteasome 26S subunit ATPase 4) ELISA Kit乙酰辅酶A羧化酶合成酶(ACC)ELISA试剂盒
产黄青霉球蛋白超家族成员5抗体Human PSMC6(Proteasome 26S subunit ATPase 6) ELISA Kit乙酰胆碱酯酶(AChE)ELISA试剂盒
大肠埃希菌alpha干扰素诱导蛋白27样蛋白2抗体Human PSMD10 ELISA Kit乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA试剂盒
季也蒙假丝酵母胰岛素抗体Human PSMD12 ELISA Kit乙酰胆碱(ACH)ELISA试剂盒
巴西果小克银汉霉Human PSMD11 ELISA Kit乙脱氢酶18家族成员A1(ALDH18A1)ELISA试剂盒
Pseudomonas tremae中间丝家族孤啡肽2蛋白抗体Human PSMD14(26S proteasome non-ATPase regulatory subunit 14) ELISA Kit乙脱氢酶(ALDH)ELISA试剂盒
吉氏根瘤菌CD339抗体Human PSMB2 ELISA Kit乙肝表面抗原大蛋白(HBV-LP)ELISA试剂盒
洋葱伯克霍尔德氏菌连接粘附分子1抗体Human PSMD13 ELISA Kit乙脱氢酶(ADH)ELISA试剂盒
停乳链球菌(StD)检测试剂盒(荧光-PCR法)衔接蛋白β抗体凝血因子Ⅷ(FⅧ)检测试剂盒FⅧ ELISA Kit
衔接蛋白γ/γ-Adaptin抗体凝血因子Ⅶ(FⅦ)检测试剂盒FⅦ ELISA Kit
水通道蛋白-9抗体凝血因子Ⅵ(FⅥ)检测试剂盒FⅥ ELISA Kit
膜粘连蛋白A3抗体凝血因子Ⅴ(FⅤ)检测试剂盒FⅤ ELISA Kit
膜粘连蛋白 A4抗体凝血因子Ⅳ(FⅣ)检测试剂盒FⅣ ELISA Kit
自噬相关蛋白8A抗体凝血因子Ⅲ(FⅢ)检测试剂盒FⅢ ELISA Kit
磷化蛋白激酶B抗体凝血因子Ⅱ(FⅡ)检测试剂盒FⅡ ELISA Kit
磷化腺苷单磷活化蛋白激酶α1抗体凝血因子Ⅰ(FⅠ)检测试剂盒FⅠ ELISA Kit
磷化蛋白激酶B抗体凝血酶原片段F1+2(F1+2)检测试剂盒F1+2 ELISA Kit
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。