使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 中华鳖虹彩病毒(STIV)检测试剂盒 (荧光PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64355
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
根瘤菌脑蛋白9抗体Human PAEP(Glycodelin) ELISA Kit一氧化氮(NO)ELISA试剂盒
马腺疫链球菌兽疫亚种丝裂原诱导蛋白2抗体Human PROX1 ELISA Kit叶酸受体α(FOLR1)ELISA试剂盒
解淀粉芽孢杆菌锌指蛋白393抗体Human PRPF19 ELISA Kit叶酸受体(FOLR)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1抗体Human PROSC ELISA Kit叶酸(FA)ELISA试剂盒
扣囊复膜孢酵母驱动蛋白样蛋白1抗体(甲状腺受体相互作用蛋白5)Human PRPF3 ELISA Kit氧化型谷胱甘肽(GSSG)ELISA试剂盒
宇佐美曲霉组蛋白甲基化KMT3B抗体(雄受体激活蛋白)Human ZNF335(Zinc finger protein 335) ELISA Kit氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA试剂盒
黑曲霉离子通道蛋白Kv4.3抗体Human PRPF40A ELISA Kit氧化高密度脂蛋白(Ox-HDL)ELISA试剂盒
枯草芽胞杆菌Killin-p53调节复制抑制蛋白抗体Human PRKX ELISA Kit氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)ELISA试剂盒
盔状毕赤酵母赖氨酸tRNA的连接酶抗体Human PRMT1 ELISA Kit氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA试剂盒
大肠埃希菌220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗体Human PRPF40B ELISA Kit氧还原蛋白过氧化物酶4(PRDX4)ELISA试剂盒
嗜冷生孢八叠球菌磷酸化220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗体Human PRPF6 ELISA Kit延伸蛋白A(EloA)ELISA试剂盒
发根土壤杆菌(发根植物单胞菌)(现1)基尔曼氏细小病VP1/VP2抗体(大鼠潜在病KRV)C端Human PRMT5(Protein arginine N-methyltransferase 5) ELISA Kit烟酰腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA试剂盒
灰毛青霉离子通道蛋白家族KCNQ1抗体Human PRMT8 ELISA Kit烟酰腺嘌呤二核苷酸(NAD)ELISA试剂盒
褐黄木耳(琥珀木耳)组蛋白H3 K9甲基转移酶抗体Human PRMT3 ELISA Kit牙骨质蛋白1(CEMP-1)ELISA试剂盒
Paenibacillus thailandensis生物钟KAT13D蛋白抗体Human PRMT6 ELISA Kit牙本质基质蛋白1(DMP1)ELISA试剂盒
柄篮状菌Kelch样蛋白36抗体Human PRPF40A ELISA Kit循环复合物(CIC)ELISA试剂盒
中华鳖虹彩病毒(STIV)检测试剂盒 (荧光PCR法)线粒体硫氧还蛋白2抗体桦木/桦木脑 BETULIN(RG)Human, Mouse, Rat
肿瘤坏死因子受体超家族成员5抗体桦木/桦木脑 BETULIN(SH)Human, Mouse, Rat
瞬时表达轴索糖蛋白1抗体桦木/桦木脑 BETULIN(SH)Human, Mouse
非受体酪氨蛋白激酶2抗体桦木/桦木脑 BETULIN(P)Human
肿瘤坏死因子α诱导蛋白5桦木/桦木脑 BETULIN(P)Human
肿瘤坏死因子C白果内酯 BILOBALIDE(AS)Human
转化生长因子β4抗体白果内酯 BILOBALIDE(AS)Human
转化生长因子β活化激酶结合蛋白1抗体7-去银杏双黄 BILOBETIN(P)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat
硫氧还蛋白结合蛋白2抗体(+)-荷包牡丹 BICUCULLINE, (+)-(P)Human, Mouse, Rat
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。