使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 嗜水气单胞菌(AH)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64356
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
巨大芽孢杆菌氯离子转运蛋白KCC4抗体Human PRKX ELISA Kit血影蛋白(spectrin)ELISA试剂盒
解淀粉芽孢杆菌磷酸化离子通道蛋白Kv1.3抗体Human Presenilin-1 ELISA Kit血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)ELISA试剂盒
鸡油菌离子通道蛋白家族成员4抗体Human PREPL ELISA Kit血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA试剂盒
荧光假单胞菌电压门控性通道蛋白亚基kv5.1抗体Human PREP(Prolyl endopeptidase) ELISA Kit血小板源性生长因子D(PDGF-D)ELISA试剂盒
蘑菇轮枝孢电压门控性通道蛋白亚基kv6.1抗体Human PPT2 ELISA Kit血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA试剂盒
大肠埃希氏菌电压门控性通道蛋白亚基KV6.3抗体Human PRH1 ELISA Kit血小板因子4(PF4)ELISA试剂盒
弗雷德里克斯堡假单胞菌磷酸化内流通道蛋白KCNJ1抗体Human PRIC285 ELISA Kit血小板因子3(PF-3)ELISA试剂盒
栖稻假单胞菌钙激活通道蛋白KCNT2抗体Human PPWD1 ELISA Kit血小板衍生生长因子CC(PDGF-CC)ELISA试剂盒
白僵菌内流通道蛋白Kir5.1抗体Human PQBP1 ELISA Kit血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)ELISA试剂盒
好食脉孢菌磷酸化内流通道蛋白Kir5.1抗体Human PRICKLE1 ELISA Kit血小板衍生生长因子AA(PDGF-AA)ELISA试剂盒
厚垣普奇尼亚菌*磷酸化ATP敏感性通道亚基kir6.2抗体Human PRICKLE3 ELISA Kit血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒
卷枝毛霉原变型电压门控通道蛋白KVβ.2抗体Human PRAM1 ELISA Kit血小板衍化生长因子BB(PDGF-BB)ELISA试剂盒
谷氨酸棒杆菌电压门控性通道蛋白Kv1.4抗体Human CSNK2A1(Casein kinase II subunit alpha) ELISA Kit血小板衍化生长因子(PDGF)ELISA试剂盒
黄柄曲霉电压门控性通道Kv1.6抗体Human PRKAA2(5′-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2) ELISA Kit血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)ELISA试剂盒
根瘤菌磷酸化通道蛋白DRK1抗体Human PRIM1 ELISA Kit血小板相关球蛋白(PAIg)ELISA试剂盒
运动节杆菌电压门控性通道Kv2.2抗体Human PRC1 ELISA Kit血小板相关抗体IgM(PA-IgM)ELISA试剂盒
嗜水气单胞菌(AH)检测试剂盒(荧光-PCR法)线粒体相关富含半胱氨蛋白抗体去氧穿心莲内酯 DEOXYANDROGRAPHOLIDE(RG)Human, Mouse, Rat
跨膜接头蛋白SIT抗体去氧穿心莲内酯 DEOXYANDROGRAPHOLIDE(RG)Human, Mouse
SKAP55蛋白抗体脱水穿心莲内酯 ANDROGRAPHOLIDE, DEHYDRO(RG)Human, Mouse
沉默调节相关蛋白2抗体脱水穿心莲内酯 ANDROGRAPHOLIDE, DEHYDRO(RG)Human, Mouse, Rat
肿瘤/抗原11.2抗体穿心莲内酯 ANDROGRAPHOLIDE(P)Human, Mouse
平滑肌蛋白抗体芹菜素 APIGENIN(P) (Compendial Traceable)Human, Mouse
SHROOM1蛋白抗体蒽黄 ANTHRAFLAVIC ACID(RG)Human, Mouse, Rat
磷化沉默调节蛋白1抗体蒽黄 ANTHRAFLAVIC ACID(RG)Human, Mouse, Rat
SCK蛋白抗体丁香酚 ANTHRANILIC ACID METHYLESTER(SG)Human
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。