使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
产品参数:
产品名称: 金鱼造血器官坏死病毒(GFHNV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64357
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
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PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
云芝驱动蛋白家族蛋白3抗体Human PRCC ELISA Kit血小板相关补体3(PAC3)ELISA试剂盒
中生根瘤菌驱动蛋白2抗体Human PRKAR1A(Protein kinase cAMP-dependent type I regulatory subunit alpha) ELISA Kit血小板生长因子(PGF)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌KIAA1522蛋白抗体Human PRDM10 ELISA Kit血小板**素(TPO)ELISA试剂盒
汉逊德巴利酵母离子通道四聚体结构域蛋白5抗体Human PRKAR1B ELISA Kit血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)ELISA试剂盒
芽孢杆菌高分子量激肽原重链抗体Human PRDM15(PR domain zinc finger protein 15) ELISA Kit血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA试剂盒
毛栓孔菌通道四聚体结构域蛋白11抗体Human PRDM4 ELISA Kit血小板碱性蛋白(PBP/CXCL7)ELISA试剂盒
贝伦格葡萄座腔菌梨生专化型Kelch样蛋白26抗体Human PRKD2 ELISA Kit血小板活化因子(PAF)ELISA试剂盒
滑菇赖氨酸,天冬氨酸,谷氨酸,亮氨酸相关序列抗体Human PREB ELISA Kit血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA试剂盒
产黄青霉Kelch样蛋白10抗体Human PRKCDBP ELISA Kit血纤肽/纤维蛋白肽B(FPB)ELISA试剂盒
蜡样芽孢杆菌Kelch样蛋白11抗体Human PRKAR2B ELISA Kit血纤肽/纤维蛋白肽A(FPA)ELISA试剂盒
弯孢菌Kelch样蛋白3抗体Human LALBA(Alpha-lactalbumin) ELISA Kit血纤蛋白原降解产物(FDP)ELISA试剂盒
云芝Kelch样蛋白14抗体Human PRELID1 ELISA Kit血纤蛋白原γ链(FGG)ELISA试剂盒
短杆菌Kelch样蛋白31抗体Human DHH(Desert hedgehog protein) ELISA Kit血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒
CystofilobasidiumKelch样蛋白32抗体Human PPP4R2 ELISA Kit血纤蛋白(Fibrin)ELISA试剂盒
致病拟杆菌电压阀门通道混合器相关亚家族成员5抗体Human PRKG2 ELISA Kit血吸虫(schistosoma)ELISA试剂盒
粪肠球菌TGF-β诱导早期应答基因1抗体Human PPPDE1 ELISA Kit血栓调节蛋白(TM)ELISA试剂盒
金鱼造血器官坏死病毒(GFHNV)检测试剂盒(荧光-PCR法)腺病 IgM Ⅲ型(间接法二步法)姜黄(标准品)Human, Mouse
腺病 IgG Ⅶ型(间接法二步法)姜黄素(标准品)Human, Mouse, Rat
腺病 IgM Ⅶ型(间接法二步法)姜(标准品)Human
腺病 IgM Ⅺ型(间接法二步法)降二氢辣椒Human, Mouse
大鼠褪黑素降香(标准品)Human
兔结合珠蛋白/触珠蛋白胶苍术甙,羧苍术苷二盐(标准品)Human, Mouse
小鼠癌胚抗原焦地黄苯乙甙A1Human
人ω干扰素焦地黄苯乙甙B1Human, Mouse, Rat
腺病 IgG Ⅺ型(间接法二步法)焦性没食子(标准品)Human, Mouse
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。