产品参数:
产品名称: 草鱼出血热病毒(GCHV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
规格: 50T
货号:BH-P64367
公司产品仅用于科研分类:荧光定量PCR试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
使用及效果:
标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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苏云金芽胞杆菌转染抑癌基因KLF6抗体Human Plexin B2 ELISA Kit酰化激蛋白(ASP)ELISA试剂盒
盘长孢状盘孢KLF样转录因子8抗体Human PLCH1 ELISA Kit纤维母生长因子受体1癌基因伴侣(FGFR1OP)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌胞质接头蛋白Keap1抗体Human PLCL2 ELISA Kit纤维母表面抗原(FSP)ELISA试剂盒
异常汉逊酵母磷酸化肠道内富含的Kruppel样因子5抗体Human PLCD4 ELISA Kit纤维连接素相关抗原(FRA)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌磷酸化抑癌蛋白EZH2抗体Human Plexin B2 ELISA Kit纤维连接蛋白(FN)ELISA试剂盒
大肠埃希菌AEG-1抗体Human PLCH1 ELISA Kit纤维介素蛋白(fgl2)ELISA试剂盒
桔青霉白介素6抗体Human PLCL2 ELISA Kit纤维胶凝蛋白3(FCN3)ELISA试剂盒
小单孢菌低密度脂蛋白抗体Human PLCH1 ELISA Kit纤维蛋白原降解产物(FDP)ELISA试剂盒
金黄色葡萄球菌LRRC19蛋白抗体Human PLCL2 ELISA Kit纤维蛋白原α链(FGA)ELISA试剂盒
麦根腐平脐蠕孢层粘连蛋白受体1单克隆抗体Human PLA2G4F ELISA Kit纤维蛋白原(Fb)ELISA试剂盒
粉红镰刀菌层粘连蛋白受体1单克隆抗体Human PLA2G4E ELISA Kit纤维蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA试剂盒
盔形毕赤酵母T活化连接蛋白抗体Human PON3(Serum paraoxonase/lactonase 3) ELISA Kit纤维蛋白(Fibrin)ELISA试剂盒
弗雷德里克斯堡假单胞菌LIX1抗体Human PLAC1L ELISA Kit纤调蛋白(FMOD)ELISA试剂盒
单格孢属凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体抗体Human PLAGL2 ELISA Kit纤溶抑制因子/凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)ELISA试剂盒
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蛋白激酶A锚定蛋白6抗体吲哚2,3-双加氧酶1(IDO1)检测试剂盒IDO1 ELISA Kit
肺α/β水解酶蛋白1抗体音猬因子N端(Shh-N)检测试剂盒Shh-N ELISA Kit
水解酶结构域蛋白13抗体抑制素B(INH-B)检测试剂盒INH-B ELISA Kit
水解酶结构域蛋白14B抗体抑制素A(INH-A)检测试剂盒INH-A ELISA Kit
水解酶结构域蛋白15抗体抑瘤素M(OSM)检测试剂盒OSM ELISA Kit
肺α/β水解酶蛋白3抗体乙型肝炎核心抗体(HBcAb)检测试剂盒HBcAb ELISA Kit
三磷腺苷结合盒转运蛋白F亚3抗体乙型肝炎表面抗原(HBsAg)检测试剂盒HBsAg ELISA Kit
三磷腺苷结合盒转运蛋白A亚5抗体乙型肝炎表面抗体(HBsAb)检测试剂盒HBsAb ELISA Kit